摘要：目的利用简并引物PCR法及重叠PCR法构建HBsAg(S),HSV-2gD模拟抗原表位P6及天然抗原表位NP6,IL-18真核表达载体,并对其表达能力进行鉴定,为后期疫苗的研制奠定基础。方法采用简并引物PCR法扩增IL-18-P6(包括P6-IL-18)片段及IL-18-NP6(包括NP6-IL-18);根据GenBank(FJ589066.1)公布的S基因设计引物,扩增获得含有重叠区的S片段(包括S1,S2,S3,S4);采用重叠PCR法扩增三基因融合片段IL-18-P6-S,IL-18-NP6-S,S-P6-IL-18和S-NP6-IL-18,经纯化回收后将其克隆到原核载体pMD 18-T simple vector中,测序正确的目的片段插入真核表达载体pcDNA3.1(-),构建重组质粒pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcD-NA3.1-S-NP6-IL-18,采用间接免疫荧光法检测靶基因的表达情况。结果成功构建了含有双抗原的真核表达载体pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcDNA3.1-S-NP6-IL-18。脂质体介导真核表达载体转染CHO细胞,间接免疫荧光法检测细胞浆中有黄绿色荧光。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcDNA3.1-S-NP6-IL-18能在CHO细胞中有效表达。

摘要：目的制备幽门螺杆菌的外膜蛋白Omp18及其多克隆抗体。方法设计Omp18基因引物,PCR扩增Omp18基因,将其连入pMD-18T载体,再克隆入原核表达载体pTriEx(TM)-4,重组质粒转化大肠埃希菌JM109DE,IPTG诱导表达Omp18蛋白,纯化后免疫家兔,以获得多克隆抗体。结果 PCR扩增的Omp18基因成功克隆入原核表达载体,重组原核表达载体转化菌表达Omp18蛋白,纯化的Omp18蛋白免疫动物后血清中获得多克隆抗体。结论本实验成功进行了Omp18蛋白的原核细胞表达并制备了多克隆抗体,为研究Omp18的功能、表达调控以及幽门螺杆菌检测和疫苗生产等奠定了基础。

摘要：考试既是对教与学的检验,又对教学发展方向有很强的导向作用.本文在医学微生物的教学过程中,对临床医学专业的学生应用了撰写综述、闭卷答题、实验操作、实验设计等多种考试模式评价学生对医学微生物学基础理论与基本操作技术的掌握情况.