摘要：目的利用计算机靶标虚拟筛选和细胞分子学理念探讨丹参的抗炎作用机制。方法利用美国化学文摘(CAS)数据库、ChemDrawUltra 7.0软件、OpenBabe 2.3.2软件、PharmMapper服务器和蛋白质库(PDB)靶标反向预测得出丹参素的作用靶标和TNF-α的配体靶标,使其对接。通过巨噬细胞体外培养和药物干预后,利用RT-PCR和ELISA法测定TNF-αmRNA和蛋白质的表达情况。结果脂多糖(LPS)刺激后1、2、6、12、24h的TNF-αmRNA表达量和TNF-αmRNA相对表达量均显著高于LPS刺激前(P值均<0.01)。LPS+丹参10μmol/L组和LPS+丹参25μmol/L组的TNF-αmRNA表达量和TNF-αmRNA相对表达量均显著低于LPS组和空白对照组(P值分别<0.05、0.01)。经LPS诱导6、12、18h后,LPS组TNF-α蛋白质表达量均显著高于空白对照组、LPS+丹参10μmol/L组和LPS+丹参25μmol/L组(P值均<0.05)。结论从计算机虚拟筛选和分子生物学水平均能证实丹参具有抗炎作用。

摘要：目的构建DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的一种异构体3B7的真核质粒表达载体,在体外评价其对人胚肾细胞株293A增殖影响。方法据GenBank中人DNMT3B7 cDNA序列设计并合成特异性引物,以DNMT3B1为模板,利用高保真Taq酶,进行PCR技术扩增DNMT3B7,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中。将携带DNMT3B7基因的质粒pCMV-DNMT3B7及空质粒pCMV-2B转染293A细胞,通过G418筛选出稳定表达的细胞系,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布。同时检测p21蛋白表达情况。结果成功构建DNMT3B7的真核表达载体并筛选出稳定表达株,与转染空质粒组相比,稳定过表达DNMT3B7组293A细胞株增殖减慢(P<0.01);过表达DNMT3B7的293A细胞S期细胞比例显著增多(P<0.05)。p21 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论 DNMT3B7基因过表达可抑制293A细胞增殖,p21可能参与了这一过程的调节。