摘要：设计两个不同区段的引物进行双重逆转录套式 PCR 检测,以期提高检出率。材料与方法(一)血清标本重庆医科大学附属第二医院门诊及住院的各型病毒性肝炎血清36份。HGV 阳性血清标本由军科院五所王海涛教授惠赠。(二)引物设计按发表的 HGV 序列(GenBank accessionnumber U44402)设计两个区段的引物,均由上海生工生物工程公司合成。***-NCR 引物1.1 外套引物上游引物序列为5′-CCG ACG CCTATC TAA GTA GA-3′,下游引物序列为5′-GC CTATTG GTC AAG AGA GAC-3′;1.2 内套引物上游引物序列5′-AAG GTG GTG GATGGG TGA TG-3′,下游引物序列为5′-TG AAG GGCGAC GTG GAC CGT-3′;

摘要：目的：为了解四川泸州地区庚型肝炎病毒（HGV）流行情况，方法：根据发表的HGV序列非编码区（NCR）设计两对引物，用RT-套式PCR方法，结果：对102例各型肝炎病人血清进行检测，发现39例HGV-RNA阳性，阳性率为38.23％。其中3例（7.69％）HGV-RNA阳性者为非A-E型肝炎，33例（84.61％）为HBV与HGV共同感染，另外3例（7.69％）为HCV和HGV共同感染。结论：提示泸州地区是HGV高流行区。PCR所得产物进行序列测序，结果表明，“泸州株”HGV非编码区与“中国株”同源性达89.4％，与“重庆株”同源性达94.3％，提示“泸州株”和“重庆株”可能为相同亚型。

摘要：目的　比较人工合成的反义硫代寡核苷酸 (asODN )和反义RNA真核表达质粒 (PCEP4-ac)在乙型肝炎(HBV)病毒转基因小鼠体内的抗病毒作用。　方法　设计合成针对HBV -pre -c/c基因的反义硫代寡核苷酸 5‘ -CAT GCCCCAAAGCCAC -3’。构建HBV -c区反义RNA真核表达质粒 (PCEP4-ac) ,并以半乳糖 -多聚赖氨酸 (Gal15 -PLL)作肝靶向载体。将 2 0只HBV转基因小鼠分为反义寡核苷酸、反义RNA真核质粒表达、生理盐水组。靶向反义硫代寡核苷酸以每只体重 15 0ug剂量 ,反义RNA真核质粒每只 10 0ug剂量 ,尾静脉注射给药 ,对照组用同样体积生理盐水同样方法给药。　结果　注射asODN和PCEP4-aC后 7d血清HBsAg已有所下降 (P <0 .0 5 ) ;14d时显著下降 (P <0 .0 1) ,且血清HBV -DNA转阴率分别为 66.7% ( 4 /6)和 62 .5 % ( 5 /8) ,而生理盐水组无明显变化。　结论　反义硫代寡核苷酸和反义RNA真核表达质粒均能在乙肝转基因小鼠体内抑制HBV复制和表达 ,且两者在抑制作用上无明显差异性。

摘要：目的：为了研究硫代反义寡核苷酸（ASON）的抗乙型肝炎病毒（HBV）作用。方法：以2.2．15细胞为靶细胞，在polyA增加信号序列设计了1段ASON，用酶联免疫吸附法检测了作用细胞的HBV病毒抗原的分泌情况。结果：ASON在每天给予2μmol／L的浓度情况下能抑制77％的HBsAg和71％HBeAg的产生，无关序列的寡核苷酸无明显抑制作用，同时未见ASON的细胞毒作用。结论：提示ASON可能成为抗HBV治疗的新手段。

摘要：应用聚合酶链反应（PCR）及其扩增产物的直接测序技术对2．2．15细胞中乙型肝炎病毒（HBtV)基因前C和C区进行测序．结果表明，根据ayw亚型HBV基因设计的引物能够扩增2．215细胞中HBVDNA，扩增产物位于221－298碱基对之间，而对adr亚型HBVDNA无扩增作用，说明PCR扩增是特异性的，所测到的132个碱基序列与aywl亚型HBVDNA完全符合，提示22．15细胞中HBVDNA属aywl亚型．本文初步确定了22．15细胞中HBVDNA的亚型，对今后抗HBV药物（如反义寡核苷酸）在体外细胞培养中的研究具有重要的指导意义。

摘要：目的构建以大鼠结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因为靶点的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。方法根据前期筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计一对有短发夹结构的RNA干扰(RNAi)靶点序列,退火形成双链DNA,克隆到质粒载体psiRNA-h7SKGFPzeo;构建重组质粒载体psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1,并进行酶切与测序鉴定。结果酶切与序列测定均提示重组质粒psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1构建成功。结论成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNAi靶位的shRNA表达质粒,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径打下了实验基础。