摘要：脾脏是可诱导由血源性病原体、死亡或凋亡细胞、外泌体等外来或自身抗原刺激机体引起免疫反应的淋巴器官。脾脏中的巨噬细胞与树突状细胞(DC)在适应性免疫反应中存在一种独特的生理协作关系:巨噬细胞可以分子黏附或分泌外泌体的方式传递自身包含的抗原给DC,由DC递呈抗原给其特异性T细胞,诱导免疫应答或免疫耐受的发生,以维护机体内环境的稳定。根据其独特的相互作用机制,可用于肿瘤疫苗接种策略的设计,为肿瘤疫苗的接种提供有效的药物靶点,还可为某些自身免疫性疾病的治疗提供可靠的理论基础。我们总结了脾脏巨噬细胞与DC之间的相互作用及其机制。

摘要：G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs)能以同源或异源二聚体,甚至是高阶寡聚体的形式存在,这些形式有不同于单体的特异功能特征,例如生物合成、配体连接、脱敏、内化和降解,因此成为备受关注的药物设计靶点。而对GPCRs这些寡聚体形式进行药物设计首要的任务是要确定这些受体之间能否形成寡聚体。因此,本文将全面介绍用于研究GPCRs寡聚化的生物化学和生物物理方法。

摘要：皮肤树突状细胞（DC）作为重要的抗原提呈细胞,在机体免疫应答或自身耐受的发生中扮演着非常重要的角色.皮肤免疫系统中定居着多种DC亚群,主要包括表皮层中的郎格汉斯细胞（LC）与真皮层中的各种真皮DC亚群.健康皮肤中的DC亚群主要有表皮LC、真皮DC（dDC）和浆细胞DC（pDC）,dDC又分为Langerin＋ dDC及Langerin-dDC等.但在炎症性皮肤,如过敏性皮炎、银屑病等病变皮肤中则存在着炎症性DC亚群.DC由于其复杂的异质性群体,导致了其各亚群的特殊化功能.皮肤DC亚群的特殊化功能,为皮肤性疾病的临床治疗及新型疫苗的研发设计等都提供了良好的新策略.

摘要：目的构建带有黄色荧光蛋白突变体Venus标签的食欲素2型受体(Orexin type 2 receptor,OX2R)点突变的真核表达载体,拟用于后续明确突变位点在OX2R介导的信号通路中的作用。方法先根据OX2R的基因序列设计带有点突变及酶切位点(Hind Ⅲ和Bam HI)的特异性引物,然后利用聚合酶链式反应(PCR)技术,以Human OX2R为模板,构建OX2R的突变体。用Hind Ⅲ和Bam HI对产物及质粒pVenus-N1进行双酶切,然后回收,连接,转化,获得重组的突变体质粒。并对重组质粒进行酶切与测序鉴定。最后将突变质粒转染HEK293T细胞,利用超高分分辨率显微镜观察突变质粒的表达及定位。结果 PCR扩增到预期的目的基因片段,酶切与测序结果显示OX2R的突变载体构建成功。超高分分辨率显微镜观察到突变质粒与野生质粒均可在HEK293T细胞膜上表达。结论成功构建了OX2R点突变的表达载体,为进一步研究OX2R的关键位点及针对OX2R新药的开发奠定了基础。

摘要：目的构建带有黄色荧光蛋白突变体Venus标签的人缓激肽2型受体(bradykinin receptor 2,B2R)真核表达载体,用于B2R与相关受体及蛋白的相互作用、B2R受体介导的信号转导机制的研究等。方法根据人B2R基因序列设计引物,以质粒pcDNA3.1-B2R为模板,PCR扩增目的基因人B2R。EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增产物及质粒pVenus-N1,经回收、连接、转化,获取重组质粒。对重组质粒进行酶切、测序鉴定。转染重组质粒至HEK293T细胞,荧光显微镜观察受体B2R的细胞定位,蛋白印迹法检测目的蛋白人B2R蛋白的表达。结果 PCR扩增出了1条长度为1176bp的基因片段,测序结果与GenBank(AY275465)相同。荧光显示B2R表达于质膜。Western blot结果显示,实验组蛋白印迹条带与目的蛋白大小相同,为44kDa。结论成功构建了pB2R-Venus重组真核表达载体,瞬时转染成功,获得了转染有重组质粒的HEK293T细胞。成功构建的重组质粒pB2R-Venus可用于后续BRET、FRET等实验研究,有助于B2R介导的信号转导机制的探讨和药物靶点的寻找。