摘要：阐明病理过程与溶酶体粘度之间的内在关系是一个巨大的挑战.到目前为止,还未有文献报道铁死亡过程中溶酶体粘度的变化情况.在本工作中,设计并合成了一种基于氟硼二吡咯(BODIPY)染料可用于检测粘度的新型远红光至近红外荧光探针FNVP.该探针对粘度变化具有良好的响应能力(λex=600nm,λem=680nm).在磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)-甘油体系(1~219 cP)中,探针FNVP在680 nm处的荧光强度约增加50倍.其次,探针具有专一性好、光稳定性强、细胞毒性小等优点,并可用于溶酶体定位及制霉菌素诱导下的细胞粘度监测.最后,利用共聚焦荧光技术,在细胞水平上进行铁死亡过程中的溶酶体粘度成像.这项工作的实施将帮助我们进一步了解铁死亡过程的生物学效应.

摘要：根据NCBI数据库中拟南芥、甘蓝型油菜和菘蓝的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)基因序列设计简并引物,从芥蓝叶片cDNA中克隆到1个PAL基因,定名为***编码区全长2 145 bp,编码714个氨基酸,在NCBI的登录号为FJ849059.半定量RT-PCR结果表明,BaPAL基因在茎、叶、花蕾、开放花朵和嫩角果中均有表达,而且以开放花朵的表达量最大,根中未能检测到.BaPAL与其他植物PAL序列比对的结果表明:芥蓝与甘蓝型油菜、白菜的关系最为接近,与同科的菘蓝和拟南芥的关系稍远,但它们都处于同一进化分支;跟蕨类植物的同源性最低,亲缘关系最远.

摘要：根据NCBI数据库中的已知序列设计简并引物,分别从芥蓝(Brassica albograbra)叶片基因组DNA和cDNA中克隆到了花青素合成酶基因。基因命名为BaANS,该基因全长1369bp,具一个长度为292bp的内含子,编码区长度为1077bp,编码358个氨基酸,序列已提交到NCBI,登录号为GU170203。序列比对结果表明,BaANS与甘蓝、拟南芥、紫罗兰、白菜和芥菜等的ANS有较高的相似性。

摘要：根据已知序列设计PCR引物,从青花菜中克隆1个NBS-LRR(核苷酸结合位点-富含亮氨酸重复)抗病基因BoCNL1;在生物信息学分析的基础上,利用RT-PCR研究该基因在不同器官中的表达模式。测序结果表明,BoCNL1基因的编码区全长为2 550 bp,编码849个氨基酸;编码蛋白具CC(卷曲螺旋)、NBS和LRR结构域;进化分析结果表明,BoCNL1与不结球白菜的关系最近,在进化树上处于同一分支,与醉蝶花的关系最远;RT-PCR结果表明,BoCNL1在根、花茎、叶、花蕾、开放的花和嫩角果中均有表达,但表达量低。

摘要：从建立大学生科技创新基金、鼓励学生积极申报各级创新课题、建立多样化的科技创新社会实践活动和实行大学生科技创新的导师制制度4方面,说明了良好的激励机制是大学生科技创新的前提。从设立设计性实验项目、实行开放性实验项目申报制度和建立开放实验室管理模式3方面论述了健全的开放实验室管理模式是实现大学生科技创新的保证,以及建立一套比较完整的大学生科技创新与开放实验室利用效率评估体系的重要性。对普通高校开展大学生科技创新与开放实验室管理方法的研究,具有一定的参考作用。

摘要：根据NCBI数据库中发布的查尔酮合成酶基因序列设计PCR简并引物,以青花菜(Brassica oler-acea ***)子叶cDNA为材料,克隆到了青花菜查尔酮合成酶基因,基因命名为BoCHS,序列已提交到NCBI数据库,登录号为GU266209。该基因的编码区全长为1182bp,编码393个氨基酸。序列比对结果表明,BoCHS基因编码的氨基酸序列与其他十字花科植物之间的同源性很高,仅存在个别氨基酸残基的差别。RT-PCR检测表明,经霜霉病菌(Hyaloperonospora parasitica)侵染后,子叶中BoCHS的表达量增加,其中以72h和96h的表达量最大。

摘要：根据GenBank数据库中已发布的肌动蛋白基因序列设计全长扩增引物,分别从白菜混合花蕾cDNA和叶片基因组DNA中克隆到各自的全长,其基因命名为BcACT,并利用RT-PCR技术研究该基因在白菜3个材料的不同器官以及保持系花蕾各部位的表达模式.结果表明:BcACT的DNA全长为1704bp,具有3个内含子,编码区长度为1134bp,编码377个氨基酸;基因表达结果显示,BcACT基因在保持系Bcajh97-01B和Polima不育系Bcpol97-05A的花蕾中表达,但表达模式存在差异,而在Ogura不育系Bcogu97-06A中未检测到;此外,BcACT基因的表达具有花药特异性,并且在花药发育过程中上调表达.

摘要：根据NCBI基因数据库提供的抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate Peroxidase,APX)基因序列设计简并引物,以青花菜(Brassica oleracea ***)叶片cDNA和DNA为材料进行PCR扩增,基因定名为BoAPX(Gen-Bank登录号:HQ871864).BoAPX的基因组全长为1 394bp,具7个内含子,编码区全长为753bp,编码250个氨基酸残基.序列分析结果表明,BoAPX的N端中没有信号肽序列,为胞质型APX,BoAPX与已知APX具有较高的同源性.RT-PCR结果表明,BoAPX的表达受霜霉菌(Hyaloperonospora parasitica)诱导,在96h时达最大值,说明BoAPX与霜霉菌抗性相关.以pBI121为植物表达载体,BoAPX为目的基因,成功构建了重组表达载体pBI121-BoAPX.

摘要：根据前期在芥蓝中克隆的BaANS基因序列设计PCR引物,从紫菜薹(Brassica ***)子叶中克隆到基因组DNA和cDNA序列,基因定名为BcANS;序列已提交NCBI数据库,登录号为GQ120562;BcANS的基因组DNA全长为1 637 bp,具1个560 bp的内含子,编码区全长为1 077 bp,编码358个氨基酸.RT-PCR检测结果表明:BcANS在光照条件下表达,在暗培养植株的子叶和胚轴中未见表达;缺磷植株的子叶和胚轴在暗培养和光照培养下BcANS基因均有表达,但光照条件下的表达量较大.序列比对结果表明:BcANS与同科的甘蓝、芥菜和拟南芥的同源性最高,而与禾本科植物的同源性最低,在进化树上相距最远.对紫菜薹花青素合成酶基因的克隆和表达分析,为进一步开展基因功能和花青素生物合成机制研究奠定了基础.

摘要：核糖体循环因子在蛋白质合成体系中发挥着重要作用,利用电子克隆和RT-PCR技术,从花生中克隆到1个核糖体循环因子基因,命名为AhRRF(Genbank登录号KF621303)。序列分析表明,该基因开放阅读框为837 bp,编码278个氨基酸,推测编码蛋白质的分子量为30.94 k D,等电点为9.63,无信号肽序列,AhRRF编码蛋白包含4个α-螺旋、6个β-折叠和一些无规则卷曲结构。系统发生分析结果表明,AhRRF编码蛋白与蒺藜苜蓿、鹰嘴豆、大豆和菜豆的核糖体循环因子具有较高的同源性。实时荧光定量PCR结果显示,AhRRF基因在花生的叶、花、根和幼果中均有表达,但叶中表达量最高,花中最低;UV-B辐射处理1 h时叶中的表达量显著上升,为对照的3.43倍,之后开始下降,24 h时显著低于对照。将构建的重组质粒p ET28a-AhRRF转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白RRF的表达,SDS-PAGE检测表明,重组蛋白的分子量大小约为30 k D,其大小与推测的大小一致。本研究为进一步探索UV-B辐射对花生分子机理的影响奠定基础。