摘要：:以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及酶切鉴定表明 。

摘要：反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作 ,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具。在过去 2 0年 ,特别是自 90年代中期第一例负链RNA病毒感染性克隆构建成功以来 ,动物RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展 ,这很大程度上归功于各种动物RNA病毒反向遗传系统的建立。这里系统总结了人类及动物非反转录RNA病毒中各类代表性成员在建立反向遗传系统时的方案设计、遇到的困难及研究者如何克服这些困难。分类讨论到的代表性病毒种属有脊髓灰质炎病毒、冠状病毒 (包括SARS病毒 )、黄病毒、野田村病毒、流感病毒、传染性法氏囊病病毒以及呼肠孤病毒等。

摘要：根据已发表的禽传染性支气管炎病毒 (IBV) Beaudette株核衣壳基因序列 ,设计了 1对特异性引物 ,采用 RT-PCR方法 ,克隆了禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株 (X株 )的核衣壳基因 ,并测定了其序列。 X株 IBV与来自 Gen Bank的其他 10株 IBV相比 ,共存在 136个点突变 ,其中有 15处是连续突变区域 ,这些点突变总体呈散在分布。X株与其他毒株的核衣壳蛋白同源性在 90 .2 %～ 99.0 %之间 ,X株 IBV与同为肾型的 N株同源性最高。

摘要：根据GenBank发表的传染性支气管炎病毒 (infectiousbronchitisvirus,IBV)Beaudette毒株核衣壳 (nucleocap sid ,N)基因序列设计一对特异性引物 ,利用RT -PCR方法分别扩增了疫苗毒株IBV -H5 2、嗜腺胃ZJ971株、嗜肾IBV -X和N株的N基因ORF ,并克隆到质粒载体 pBluescriptSK( +) ,测序后用PCgene和DNAStar软件分析。结果显示 :4株IBV的N基因均含有一个长 12 30bp的ORF ,编码一由 40 9个氨基酸残基组成的N蛋白。嗜肾IBV -X和N毒株的N基因存在HindⅢ酶切位点。与来自GenBank的另外 8株IBV比较 ,ZJ971株与它们的N蛋白的核苷酸及氨基酸序列同源性分别在 88 2 %～ 98 6 %和 91 2 %～ 97 8% ;N株则分别为 86 6 %～ 87 4%和90 5 %～ 91 5 % ;X株分别为 86 3%～ 87 4%和 90 0 %～ 91 5 % ;H5 2分别为 90 4%～ 98 3 %和 92 0 %～98 0 %。ZJ971株、N和X株的N基因的突变特点是散在的点突变。嗜腺胃ZJ971株核衣壳蛋白的氨基酸序列的最显著的遗传变异特征是H111D、S117A、V14 2 L、P171A和E4 0 1D ;嗜肾IBV -X和N株核衣壳蛋白的氨基酸序列的最显著的遗传变异特征是A4 6S、A4 8P、L189R、N190 S、E2 2 0 D、I2 2 3A、V2 3 6Y、S2 37K、K2 4 0 Q、Q2 86R、T2 99K、R30 1E、E33 4 D、V33 5E、V336P和T351S。

摘要：鸡白细胞介素 2 (chIL 2 )是近年来新发现的一类细胞因子 .根据Sundick等发表的鸡IL 2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法分别扩增和克隆了我国仙居鸡、丝羽乌骨鸡两个地方品种和艾维茵商品肉鸡IL 2cDNA .仙居鸡、丝羽乌骨鸡和艾维茵商品肉鸡IL 2基因的编码区均由 42 9nt组成 ,编码一个由 143个氨基酸组成的前体蛋白 .基因 5′端含有 17个核苷酸 ,3′端含有 2 85个核苷酸组成的非编码区 ,3′ UTR中含有 5个重复的“ATTTA”序列 .编码蛋白氨基酸与来自GenBank的Kestrel、Obese和SC品系的来杭鸡比较 ,氨基酸的突变主要发生在 2 8～ 3 2位 .而这一区域仙居鸡和丝羽乌骨鸡的编码氨基酸序列与Kestrel来杭鸡相同 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡相同 .基因系统进化树分析表明 ,仙居鸡、丝羽乌骨鸡和Kestrel来杭鸡具有很近的亲缘关系 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡具有很近的亲缘关系 .中国的药用鸡品种———丝羽乌骨鸡在非常保守的 13

摘要：核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %～ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %～ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4

摘要：根据Sundick等发表的鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因序列设计一对特异性引物 ,从伴刀豆球蛋白A (ConA)体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法获得艾维茵商品肉用鸡IL 2cDNA基因。将其连接到测序载体 pGEM TEasyVector ,测序后用Pcgene和DNAstar软件分析。结果显示 ,艾维茵商品肉用鸡IL 2基因长 734bp ,编码一由 14 3个氨基酸组成的前体蛋白 ,与来自GenBank的另外 3个品系 (Kestrelleghorn ,Obese和SC)鸡IL 2比较 ,其核苷酸和氨基酸序列同源性为 98.9%～ 10 0 %和 97.2 %～ 10 0 %。二级结构预测表明 ,艾维茵商品肉用鸡IL 2N端存在一条由 2 2个氨基酸组成的前导肽及 4个半胱氨酸形成的链内二硫键 ,并存在类似人IL 2的 4个α螺旋 ,这些结构很可能在维持IL 2生物学活性中发挥重要作用。基因系统进化树分析表明 ,艾维茵商品肉用鸡与SC鸡IL 2的亲缘关系较近 ,与火鸡、Kestrelleghorn和Obese鸡IL 2的亲缘关系较远。

摘要：参照已发表的捻转血矛线虫H11蛋白基因序列设计引物,以***株的总RNA为模板,进行RT2PCR扩增,成功扩增出H11基因。将PCR产物与pUCm2T载体连接后,转化DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并测序。序列分析表明,其核苷酸序列与国外报道的H11基因的同源性为99.5%。编码氨基酸序列具有氨基肽酶的保守序列,推测可使虫体不能获得所必需的氨基酸而导致死亡。

摘要：根据猪链球菌2型的溶血素(haemolysin)的基因序列设计一对引物,成功地扩增了溶血素基因,并建立了检测溶血素的PCR方法.用EcoR 限制性内切酶进行酶切,获得了与预期大小一致的869bp和633bp的两个片段.同时另设计一对内引物,进行巢式PCR,亦能扩增出预期片段.PCR检测的敏感程度可达100个细菌;对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌和猪放线杆菌等的PCR检测结果均呈阴性.表明建立的猪链球菌2型溶血素PCR检测方法,其特异性和敏感性均很高,可作为猪链球菌病快速诊断的方法.

摘要：五代宋元时期的绘画是中国绘画的峰颠，空前而绝后，这一点恐怕无人持有异议。然而由于年代久远、缺少题款、赝品水平高等诸原因，鉴赏它们却并非易事。从古至今的鉴赏家似乎对印章、纸绢、题款、著录等客观因素重视有余，对各家风格这一主观因素重视不够。我认为对各家画风的领悟应始终是鉴赏古代绘画最可靠的依据，然而这又不可避免带上了极强的主观性。从这个意义上看，鉴赏只是画者与观者两颗变化莫测的心相互揣摩、永远地揣摩下去罢了，也许我们永远无法理出一个条理不紊的表格，但舍弃此道似乎更无事可为。