摘要：蛋白质之间的相互作用对生命活动的调节具有重要意义,为了精确检测纳米级蛋白质之间的相互作用,促进高端成像技术的发展。利用共聚焦显微镜系统和图像处理软件ImageJ,开发和优化了受体光漂白荧光共振能量转移(FRET)技术。该实验总结了FRET荧光对的特点并提出选择方法,确定了受体光漂白FRET技术的操作步骤,分析了FRET技术的限制条件并给出了优化方案,详细描述了图像展示和数据分析的具体方法。该文建立了从实验设计到数据分析的一整套实用可靠的操作方案,可为显微成像技术从业者提供借鉴。

摘要：组织单细胞悬液制备是细胞生物学中的基础技能,常用的组织解离方法有机械法和酶法,不同解离方法在细胞得率和细胞活性上差异较大。在神经科学的各个研究领域,包括发育研究、疾病病理生理学、药物和毒素筛选,以及神经疾病动物模型的移植等均需要使用分离的单细胞。然而神经组织细胞间紧密的黏附性及轴突和树突的易碎性阻碍单细胞的获得。自动化组织处理器结合机械法与酶法双重作用可获得高质量的细胞悬液。利用这一技术开展自主设计型神经组织单细胞悬液制备实验,以提升学生综合分析应用能力,拓展对前沿科学技术的认识。通过科研与教学相融合的方式,更好地激发医学生的学习热情,提高医学生的科研素质,实现研究型与创新型人才培养的目标。

摘要：激光共聚焦同步双扫描(simultaneous,SIM)技术在常规扫描单元的基础上,引入一个同步扫描单元(SIM scanner),该技术独立控制了两个激光束,一个用于激光光刺激,另一个用于同步成像。本实验中,采用激光共聚焦同步双扫描系统的405 nm和488 nm激光分别对细胞的特定部位进行刺激和同步成像,实时检测了LC3复合物的形成,记录并分析了乙酰化前后LC3的光动力学变化过程,证实了LC3的脱乙酰化修饰是自噬性降解所必须的,本实验体系为激光共聚焦双扫描技术的推广提供了一个很好的平台。SIM技术的应用,解决了刺激过程无法成像的问题,为漂白后荧光恢复(fluorescence recovery after photobleaching,FRAP)、漂白后荧光损失(fluorescence loss in photobleaching,FLIP)和光诱导激活等研究提供了最佳的解决方案,可作为光刺激的一种实验模式在很多实验设计中进行延伸应用。

摘要：传染性法氏囊病(IBDV)是目前危害世界养禽业的主要传染病之一。本文对传染性法氏囊病作了简介,从IBDVD病理组织学、细胞免疫学、抗原变异、毒力以及病毒复制入手,探讨IBDV的致病机理。从IBDV诱导细胞凋亡,炎症反应,免疫抑制等方面探讨其分子致病机理。随着对传染性法氏囊病毒致病机制研究的不断深入,以期为设计抗病毒药物奠定基础,为该病的预防提供理论依据和线索。

摘要：为探索建立新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群分析方法,利用流式细胞仪设计并优化针对Treg细胞的15色流式染色方案。该文收集了皮肌炎患者和健康志愿者的外周血,用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。该研究分别对抗体浓度、染色时间、孵育温度、是否避光、荧光素放置时间及上机收样电压等进行优化,最终完成单样品15色高通量流式检测,并结合FlowJo软件对目标细胞Treg亚群进行高阶数据分析。结果表明,(1)BLANK十字架法结合染色指数法可确立方案(Panel)的最适电压值;(2)抗体TIGIT BV421、HLA-DR PE、CD127 BV605、CD103 R718、CD25 PE-Cy7滴定后的最优标记量分别为1.25、1.25、3、2.5、5μL/test(100μL染色体积/test);(3)多色流式抗体染色的最佳条件是4°C、避光条件下孵育30 min;(4)样本制备后应尽快检测,放置时间不超过24 h。该研究中建立的15色Panel可成功分析人PBMC样本Treg细胞亚群及相关活化分子的表达情况。此方法可应用于以皮肌炎为代表的伴有Treg细胞缺陷的外周血Treg淋巴细胞亚群的分析。

摘要：目的针对如何提高流式分选试验分选得率和纯度的问题,建立高效的流式细胞分选条件,为流式分选技术应用提供参考依据。方法2019年10月至2020年6月设计以BD FACS Sorp Aria II为例,首先以微球样品作为研究对象,经检测不同分选速率、不同分选模式及不同喷嘴条件下的分选结果,分析其影响因素,并以优化的条件尝试高效分选naïve T细胞。结果70μm喷嘴,purity模式下,flow rate 1.0、3.0、5.0、7.04种速率的分选纯度均达到98%以上,但flow rate值越高,分选得率越低。不同分选模式分选时,yield模式的分选效率和得率都是最高的,分别为(99.67±0.33)%、(79.78±7.14)%,但其纯度显著低于另2种模式(均P0.05)。结论分选原代naïve T细胞,70μm喷嘴,flow rate1.0,purity模式条件最合适。