摘要：目的构建小鼠组蛋白H3K27三甲基转移酶EZH2基因慢病毒载体及鉴定。方法以携带EZH2 cDNA的PCMV-SPORT6载体为模板,自行设计携带有Kpnl和Xmal酶切位点的引物PCR扩增出目的基因编码序列,扩增产物用内切酶酶切后定向克隆到慢病毒载体PLenti-eGFP-NEO中,通过PCR、酶切及测序验证载体;将重组慢病毒载体和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE及pMD2G组成的四质粒系统,共转染293T细胞包装成慢病毒,收集含病毒颗粒的细胞上清液,浓缩和纯化后得到高效价的病毒液,转染293T细胞进行效价测定。结果 PCR扩增出约2241bp的序列,构建的慢病毒载体测序结果与Gene-bank报道的目的基因序列一致;四质粒系统成功共转染入293T细胞中,在细胞中能够稳定表达,包装出了2.1×108TU/ml的病毒液。结论成功构建了小鼠EZH2基因慢病毒载体,并得到2.1×108TU/ml高效价的病毒液。