摘要：通过将三维(3D)生物打印的类肝水凝胶结构体,经肝表面贴覆法植入纤维化肝兔模型,探讨改善肝纤维化以及形成类肝组织结构的可行性。采用兔离体肝脏胶原酶消化法提取兔原代肝细胞,并采用四氯化碳(CC14)皮下注射诱导兔肝纤维化模型。选取30只肝纤维化兔,随机分为实验组、对照组、假手术组,每组10只。3D生物打印兔肝细胞-海藻酸钠-明胶3D水凝胶网格状结构体片段,经肝表面贴覆法植入兔纤维化肝,为实验组。植入16 d后,检测兔肝功能生化指标及肝脏组织病理学变化,观察肝纤维化的发展程度,以及类肝组织结构形成情况。按照设计的参数,打印出含有兔原代肝细胞的网格状水凝胶结构体。通过LIVE/DEAD双荧光染色观察,打印后肝结构体的细胞存活率为82%±3%。兔肝细胞水凝胶支架体内植入16天后,可见每个植入物的大部分支架材料尚未降解,未降解的植入物与肝脏贴合紧密,融合生长。通过检测兔肝功能生化指标及植入物之下的肝脏组织病理学观察,实验组兔肝功能生化指标分别为:ALT(90.26±13.05)U/L,AST(75.37±13.45)U/L,γGT(16.62±6.72)U/L,ALB(32.48±4.43)g/L,与对照组、假手术组之间比较均P>0.05。实验组、对照组、假手术组的肝纤维化程度病理学检查评分结果分别为2.95±0.50、3.11±0.58、3.02±0.62,各组之间比较均P>0.05。兔肝细胞-3D水凝胶支架的植入,使肝功能生化指标及兔肝脏纤维化程度稍有改善,但各组之间比较均无统计学意义。组织学观察结果表明,实验组植入物中肝细胞均匀分布,未见细胞变性及死亡,可形成类肝组织结构。3D生物打印的肝结构体具有再造肝样组织片段和实现部分肝功能的潜力,将在基础医学和临床之间搭建桥梁,为肝脏再生打下基础。

摘要：目的建立灵敏、稳定、特异的实时荧光PCR方法,用于戊型肝炎病毒的定量检测。方法采用生物信息学方法,分析比对戊型肝炎病毒全序列,并针对国内流行的戊型肝炎病毒株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物和Taqman探针,建立实时荧光定量PCR方法。并从灵敏度、稳定性及特异性等方面对建立的方法进行综合评价。结果戊型肝炎定量检测的灵敏度为5个目的拷贝,定量的线性范围为5×（100-108）9个数量级。批内重复性检测显示其变异系数为1.49%;批间重复性检测显示其变异系数为1.98%和2.23%。对22份临床标本的检测结果显示具有良好的特异性。结论建立的实时荧光PCR方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强等特点,适用于戊型肝炎病毒的定量检测。

摘要：背景:抗突变剂能有效阻止化学致癌物对遗传物质的损害,因此,积极寻找具有抗突变作用的生物资源具有重要的意义。目的:系统评价壳聚糖纳米混悬剂对多种强阳性诱变剂的抗突变效应。设计、时间及地点:体外对照观察试验,于2007-03/2008-03在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料:自制壳聚糖纳米混悬剂(平均粒径25.3nm,占总粒子数99.1%),8种诱变剂均购自美国Sigma公司。方法:用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),将壳聚糖纳米混悬剂设定为高、中、低(2500,1250,625μg/皿)3个剂量组,分别对NaN3、MMC、9-AA、2,7-AF、NQNO、Dexon、CP、2-AF等8种常用诱变剂进行抗突变作用观察。主要观察指标:根据平均回变菌落数计算抑制率,用抑制率判断其抗突变作用程度。结果:高、中剂量组壳聚糖纳米混悬剂对NaN3、MMC、9-AA、2,7-AF、NQNO、CP和2-AF分别呈中度抑制和弱抑制,低剂量组无抑制作用。壳聚糖纳米混悬剂对诱变剂Dexon显示出较强的抗突变效应,3个剂量组对Dexon诱发的回变菌落数均显著下降(P<0.01)。随着壳聚糖纳米混悬剂浓度的增加,对不同致突变剂产生的诱发回变菌落数明显下降,抑制率上升,呈现量效关系。结论:壳聚糖纳米混悬剂对多种诱变剂具有不同程度抗突变效应,并呈现量效关系。

摘要：背景：壳聚糖是-种天然的多糖，具有生物降解性、生物相容性及安全无毒等特点，因而成为基因治疗载体研究的热点。目的：将壳聚糖包载含戊型肝炎主要抗原表位基因片段的重组质粒pcHEV23，制备成壳聚糖．pcHEV23纳米粒，并观察其在小鼠体内的免疫增强效果。设计、时间及地点：对比观察实验，于200706／200808在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料：将等浓度pcHEV23分别与质量浓度为1．4，0．7，0．4，0gm的壳聚糖按1：1体积比混合，复凝聚法制备壳聚糖（高）-pcHEV23、壳聚糖（中）-pcHEVz3、壳聚糖（低）-pcHEV23、空白壳聚糖等4种纳米颗粒。方法：以空质粒pcDNA3、空白壳聚糖纳米粒、质粒pcHEV23为对照组，壳聚糖（高）-pcHEV：3、壳聚糖（中）-pcHEV23、壳聚糖（低）-pcHEV23为实验组，进行免疫小鼠，共免疫3次，每次间隔3周，免疫后2周断尾取血，并于末次断尾采血后进行眼球摘除取血。主要观察指标：检测制备的纳米粒平均粒径、包封率、抵抗核酸酶降解能力；ELISA方法检测免疫小鼠后血清中HEVIgG抗体产生情况；流式细胞仪检测外周血CD4＋、CD8＋T淋巴细胞百分比和CD4＋／CD8＋比值。结果：制备的纳米粒粒径170～470nm，对质粒pcHEV23的包封率均〉95％，能有效抵抗核酸酶降解，起到保护pcHEV23的作用。免疫实验表明壳聚糖-pcHEV23纳米粒可上调小鼠血清HEVkG抗体水平，并显著提高小鼠外周血CD4＋T淋巴细胞百分比及CD4＋／CD8＋比值。结论：壳聚糖能高效装载外源基因pcHEV23，保护其免受核酸酶的降解，有效提高小鼠细胞免疫水平，显示出具有良好的免疫增强作用，作为基因载体具有较大的应用潜力。

摘要：背景:裸DNA在基因治疗中易被体内核酸酶降解。携载DNA疫苗的病毒类载体存在致癌和引发免疫应答等安全问题,且制备方法复杂。非病毒载体(尤其是阳离子-DNA聚合物)具有低毒,低免疫反应,能重复给药,易于大量制备等优点。壳聚糖是一种天然阳离子碱性聚多糖,具有良好的生物可降解性、生物相容性及生物安全性。目的:制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖,观察其表征及对DNA的保护作用。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-06/2008-05在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料:壳聚糖,脱乙酰度88%,批号061220,由青岛利中甲壳质公司提供。质粒pHEV23为浙江省医学科学院生物工程研究所实验室提供。方法:通过脱水剂Na2SO4诱导的复凝聚沉淀法制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖。根据壳聚糖质量浓度1.4,0.7,0.4g/L,分别制备壳聚糖(高)-pHEV23、壳聚糖(中)-pHEV23、壳聚糖(低)-pHEV23。主要观察指标:激光纳米粒度分析仪测定壳聚糖-pHEV23粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率;凝胶阻滞实验分析壳聚糖和pHEV23的聚合;DNaseⅠ的保护试验分析壳聚糖-pHEV23的抵抗核酸酶降解能力;释放实验评价壳聚糖-pHEV23的稳定性。结果:制备的壳聚糖-pHEV23粒径在170～470nm,其中壳聚糖(低)-pHEV23171.6nm,壳聚糖(中)-pHEV23387.0nm,壳聚糖(高)-pHEV23467.3nm。壳聚糖(低)-pHEV23Zeta电位为+22.9mV。包封率均>95%,其中壳聚糖(低)-pHEV2395.8%,壳聚糖(中)-pHEV2396.7%,壳聚糖(高)-pHEV2397.1%。凝胶阻滞分析表明,壳聚糖和pHEV23之间通过静电作用完全结合,纳米粒带正电荷。DNaseⅠ保护试验表明,壳聚糖-pHEV23能有效抵抗DNaseⅠ酶降解,对pHEV23有保护作用。稳定性试验表明,4℃保存60d,纳米粒仍能较稳定地包裹pHEV23。结论:壳聚糖-pHEV23能高效装载外源DNA,稳定性良好,并保护其免受核酸酶的降解。

摘要：目的:建立双重实时荧光PCR方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法:根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流感病毒检测和定量;针对HA基因设计引物和探针,用于病毒分型。建立和优化双重实时荧光PCR反应体系,进行敏感度和特异性评价,同时对32份已知亚型的流感病毒样本进行检测,验证所建方法的实用性。结果:基于M基因的实时荧光PCR方法定量范围为5×101到5×108个目的拷贝。经优化的双重实时荧光PCR方法对不同亚型流感病毒的检测灵敏度在50～500拷贝之间,各亚型之间没有交叉反应。建立的方法能够检测出本研究涉及的所有流感病毒标本,分型准确率达到96.9%。结论:建立的双重实时荧光PCR方法具有敏感度高,特异性好等优点,实现对流感病毒样本准确分型,适用于流感的鉴别诊断及病毒载量测定。

摘要：在农药残留免疫分析中,农药小分子半抗原的分子设计及合成是基础和关键。本文对近年来国内外关于农药小分子半抗原的设计及合成、合成的影响因素、半抗原与载体蛋白偶联方法的研究现状及应用作一综述。

摘要：霍乱肠毒素（CT）是霍乱弧菌重要的毒力因子，内含A和B两个亚单位。A亚单位（CTA）为毒性亚基，B亚单位（CTB）不具毒性。CTB因其独特的生理功能已成为重要的佐剂之一，近年来备受各国学者重视。深入探究CTB的免疫调节机制有助于更好地设计疫苗并优化其效果，此文将对CTB作为免疫佐剂在疫苗研究中的进展进行综述。

摘要：microRNA(miRNA)作为一种重要的基因表达调控分子,在宿主与病毒相互作用时发挥重要作用。研究发现,宿主感染流感病毒后miRNA表达发生改变,多种miRNA影响流感病毒复制和宿主的抗病毒反应,这类miRNA及其靶点有望成为基因药物和减毒活疫苗研发的重要突破口。除此之外,植物来源的miRNA和主动设计的人工miRNA也体现出抗流感作用。本文就miRNA在抗流感病毒方面的研究进展做一综述。

摘要：目的:建立环介导等温扩增(LAMP)方法用于H9亚型流感病毒基因的检测,为基层实验室提供简便快速的检测方法。方法:根据GenBank中公布的H9亚型流感病毒血凝素基因序列,选择保守区域应用在线软件PrimerExplorer V4设计LAMP引物。以克隆有H9亚型流感病毒血凝素基因的阳性质粒为模板,建立和优化LAMP检测方法,并进行灵敏度、特异性评价和病毒检测。结果:LAMP检测方法对H9亚型流感病毒基因的检出灵敏度达到5个拷贝,比普通PCR方法高出2个数量级,对H1、H3、H5亚型流感病毒不产生非特异性扩增,显示出良好的特异性。结论:建立的LAMP检测方法能快速、敏感、特异地检测H9亚型病毒,适合在基层实验室推广使用。