摘要：目的:优化酶法辅助提取人工培育蝉花多糖的工艺,考察料液比、酶添加量、酶解温度、提取时间等单因素对多糖得率的影响。方法:借助Box-Behnken设计的四因素三水平法建立了该多糖提取工艺的理论模型,并研究多糖对三种自由基的清除效果,根据Fick第二定律建立了人工培育蝉花提取的动力学模型,并根据速率常数、相对萃余率、活化能等参数,研究其动力学和热力学性质。结果:经响应面分析得到该多糖最佳提取工艺为:料液比1:30 g/mL、酶添加量1.6%、酶解温度67℃、提取时间90 min,在此条件下蝉花多糖的得率可达7.91%,与理论值接近。在该工艺下的人工蝉花粗多糖的DPPH自由基和羟自由基的IC_(50)值分别为0.54和0.60 mg/mL,ORAC值是45.62 Troloxμmol/g,具有良好的体外抗氧化活性。结论:利用酶法辅助提取人工培育蝉花多糖,为该类已商业化的蝉花资源的多糖组分开发提供了理论基础。

摘要：以中国被毛孢为发酵菌种,采用Box-Benhnken组合设计、响应面分析法对中国被毛孢胞外多糖(Ophiocordyceps sinensis extracellular polysaccharides,OPS)发酵的影响因素进行了优化研究,得出了最适液体发酵工艺:pH6.17、葡萄糖33.36 g/L、蚕蛹粉21.43 g/L,该条件下OPS含量可达355.79 mg/L,与理论值基本吻合。在此基础上,通过细胞增殖检测试剂盒测定OPS分别在100、200、400、600μg/mL浓度下对HT-29细胞的抑制率,发现其对HT-29细胞有较好的抑制作用。流式细胞仪检测表明,OPS对HT-29细胞生长的抑制作用与OPS诱导的细胞凋亡有关,细胞早期凋亡率从2.34%增加到24.0%。OPS处理后S期细胞增加到37.64%,G0/G1期细胞相应减少,OPS导致细胞周期在S期停滞。该研究结果可为OPS的开发利用提供新思路,为其在食品和药品中的开发与应用提供理论依据。

摘要：选择产紫杉醇的内生真菌EF-04和葡萄糖、豆饼粉、乙酸钠三种营养因子,在单因素试验的基础上,通过Box-Benhnken组合设计和响应曲面分析法优化内生真菌液体发酵产紫杉醇的发酵工艺条件进行紫杉醇人工生产试验。响应面分析结果表明,内生真菌液体发酵产紫杉醇的最佳培养条件为葡萄糖25.54g/L、豆饼粉7.94 g/L、乙酸钠5.64 g/L;此条件下的验证试验表明,实际紫杉醇得率为313.52μg/L,与理论值基本吻合。

摘要：【目的】获得品种间具有多态性且稳定可靠的序列特异性标记,用于薄壳山核桃杂交育种中的分子鉴定。【方法】选取5个性状差异较大的品种Van Deman、Moore、Nacono、Davis和Pawnee,提取高质量基因组DNA,经合适的限制性内切酶酶切后分别构建文库,利用Illumina HiSeq高通量测序仪获得每种样品的简化基因组数据。再进行序列与基因库的比对和各品种间的差异片段比对,获得差异片段和位点,设计适合特异性片段扩增的PCR引物。然后通过试验筛选这些引物,并进行多个品种的多态性分析。【结果】5个品种的基因组DNA经简化基因组测序后,共获得25963442个reads,合计3816.62 Mb碱基,其(A+T)/(C+G)的值约为1.63,长度质量指标Q20%大于95%,Q30%大于90%。经初步组装、精确组装和品种序列差异比对后,共获得特异序列3916条,在差异位点上设计3893对引物,然后进一步分析引物扩增可靠性,包括二级结构、碱基比例等,挑选其中1133对引物,再根据理论扩增产物与核桃基因组的同源性,挑选出扩增产物同源性最高的候选引物473对,占可用引物数量的40%。利用PCR技术,测试这473对引物在23个山核桃品种中的多态性差异,最终获得能产生多态性位点的86对引物,占被筛选引物对1/5左右。将其中80对单一条带用于品种鉴定和亲缘关系分析。利用这些引物对的组合,可以将其中17个品种鉴定出来。基于这些多态性片段进行的亲缘关系分析结果表明,聚类结果与实际的亲缘关系有部分一致性,如揭示了Choctaw与Dependable、Moore与barton之间的亲缘关系。【结论】利用简化基因组测序方法可以挖掘出薄壳山核桃品种的序列特异性分子标记,运用这些标记引物的组合可以进行大量品种的鉴定。所开发的80对引物可用于山核桃杂交育种中亲本组合的选择。