摘要：目的利用簇状规则间隔回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑系统构建质粒并敲除裸鼹鼠皮肤成纤维(NMR skin fibroblasts,NSF)细胞HIF-1α基因,为研究裸鼹鼠的耐低氧机制及缺氧相关疾病的发生发展机制提供体外细胞模型。方法针对裸鼹鼠HIF-1α基因的1~4号外显子区域设计4对sgRNA序列,并成功构建表达质粒。筛选得到最优sgRNA后,转染HEK-293T细胞收集上清液测定病毒滴度。前期用pLenti-Cas9(blast)病毒感染NSF细胞,后用制备的HIF-1α-sgRNA病毒感染表达Cas9蛋白的NSF细胞。经药筛后观察荧光表达,同时提取细胞gDNA和蛋白。通过T7E1酶和Western Blot检测NSF细胞中HIF-1α基因变化及蛋白表达情况。结果Sanger测序显示,所设计的sgRNA成功插入到pX459和pKLV2-U6-sgRNA2载体上,序列验证正确,重组质粒构建成功;T7E1酶切实验成功切除3条带,sgRNA的打靶效率为54%,Western Blot结果表明,经药筛后的裸鼹鼠NSF细胞HIF-1α基因敲除成功,蛋白水平显著降低(P=0.0019);且未发现HIF-1α敲除细胞形态的明显变化,基因敲除对细胞增殖能力无明显影响。结论成功构建靶向裸鼹鼠HIF-1α基因的CRISPR/Cas9质粒,且质粒靶向敲除HIF-1α基因功能验证成功,将有利于裸鼹鼠耐低氧机制研究,并为人类缺氧相关疾病防治提供理论依据。

摘要：为提高微压氧舱压力控制精度和氧气浓度控制效果,本研究建立舱内压力系统数学模型和氧气浓度数学模型,分析为降低氧气浓度而进行的通风换气对舱内压力的影响,提出了基于模型预测控制(model predictive control,MPC)的系统控制策略。通过样机性能测试,表明所提出的控制策略可行,可精确控制压力波动幅度,维持舱内目标氧气浓度。

摘要：医学免疫学实验课是医学免疫学的实践课程,是辅助学生理解和掌握抽象的免疫学理论知识,培养学生实践动手和理论转化应用能力的必要和重要途径。随着免疫学理论体系及相关技术应用的不断完善和突破创新,免疫学实验教学作为承接理论和实践的重要纽带,亦需紧跟学科发展而进行优化改革。文章依据传统免疫学实验课程设置中的不足,从教学模式和教学内容两个方向探索性地提出课程优化措施,拟在模式上强化学生主观能动性、引导聚焦实践过程,融入现代媒体教学提升整体实践教学体验;在内容上推陈出新,积极与现代免疫学理论和技术发展接轨,同时纳入自主实验设计以强化学生创新思维和实践能力,同时有机融入思政元素促进学生从实践教学中形成正确的价值观。

摘要：目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组。制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组。用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性。评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较。用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测。对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测。结果引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组。CprMG2引物组可检测浓度低至10-6 ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3×10^(3)拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/μl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝。最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应。LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3×10^(3)拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3×10^(4)拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测限分别为1.3×10^(3)拷贝、1拷贝,与qPCR检测的最低检测限(1.3×10^(3)拷贝、1拷贝)相当。LAMP微流控芯片检测模拟现场样品的结果显示,CprMG2可检出与埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA 1∶10、1∶100和1∶1000混合的登革病毒RNA,NS2AG1最低可检出1∶100混合的登革病毒,特异性均为100%。LAMP微流控芯片检测5地现场采集白纹伊蚊的结果均为阴性。结论建立了基于LAMP微流控芯片检测登革病毒的方法,该法敏感性和特异性高,检测时间短,可用于现场蚊媒携带登革病毒的检测。

摘要：目的探讨职业动机训练对海军青少年航空学校学生职业价值观与学习动机的影响。方法设计飞行职业动机训练方案,采用对照试验,对海军某青少年航空学校学生进行为期4个月的职业动机训练。比较对照组与试验组学生实验前、中、后的职业价值观问卷与学习动机问卷总分与各因子分的差异。结果试验组学生的发展因子分、声望地位因子分较训练前提升(发展:t=-2.095,df=61,P0.05)。试验组学生内部学习动机后测分数比前测、中测分数提升(t前测vs.后测=-2.664,df=59,P0.05)。结论职业动机训练可以有效提升海军青少年航空学校学生的内部学习动机与职业价值观的自我发展水平。

摘要：目的:调查医疗岗位任职教育培训人员对消毒基本知识的掌握程度,为相关教学培训和宣教服务提供理论依据。方法:设计调查问卷,组织任职教育培训人员集中填写,现场回收问卷,整理所有数据录入SPSS 25.0 建立原始数据库,并进行描述统计学分析。结果:共发放问卷275份,其中有效问卷268份,占97.5%。本次调查培训人员性别比例(男:女)为1:1.06,平均年龄(33.0 ± 5.0)岁,平均工作时间(6.3 ± 4.9)年。根据调查结果显示,关于常用物理消毒方法,煮沸消毒知晓率为91.8%,紫外线辐照消毒知晓率为85.8%,日光暴晒知晓率为82.1%;对于其它物理消毒方法,自然通风知晓率为67.5%,巴斯德消毒知晓率较低,为30.2%,电离辐射消毒知晓率为1.9%。关于常用化学消毒方法,84消毒液知晓率为96.6%,碘伏消毒知晓率为93.3%,酒精消毒知晓率为91.4%;对于其它化学消毒方法,臭氧消毒器知晓率为49.5%,肥皂刷洗知晓率为40.7%。关于消毒应用场景调查,显示部分学员错误的认为可以用酒精(7.8%, 21/268)和戊二醛(7.5%, 20/268)进行空气消毒,而且错误认为酒精(10.1%, 27/268)、季铵盐类消毒剂(0.7%, 2/268)和含碘消毒剂(0.4%, 1/268)不能用于金属物体表面消毒。结论:医疗岗位任职教育培训人员对消毒方法的基本知识掌握程度尚欠缺,科学消毒的方法需要加强,提示要加强相关知识的宣教,并在即将开展的预防医学本科生消毒学课程中,加强基本知识的讲解。

摘要：目的 解决现有医警联动协同机制响应缓慢、效率低下的问题,建立新型突发事件医警联动协同机制。方法 通过实地调研,了解现行存在问题,针对因素进行特性分析和流程分解,拟定医警联动机制和关键流程初稿。而后形成焦点专家小组集中进行讨论,确立最终医警联动协同机制,使用CPN tools基于前期构建的流程进行建模。结果 根据实地调研和文献研究发现国内医警的信息共享未畅通,警察极少参与现场的急救任务,双方协同不足。本研究构建了“接警-信息搜集和评估-现场处置-伤员转运”全流程的医警联动协同模式。并绘制了流程图。在建模中充分考虑不同规模事件、不同伤情类别和不同应急场景下医警协同的可能,形成了医警联动协同模型。结论 本研究创新了新型院前医警联合急救的系统优化设计方法,提供了理论分析和模型验证,能够为公共应急事件的应对提供参考。

摘要：实验教学是病理生理学课程中的重要组成部分,可以帮助学生从整体水平直观地了解疾病,深刻地理解发病机制。肝性脑病实验教学是病理生理学实验教学中的重要内容之一,但是以往的教学中存在着手术操作繁琐、造模成功率不稳定、与临床结合不紧密等问题,笔者通过对该实验的教学内容与课堂实施的重新设计与改进,达到了紧密结合临床、学生自主参与度高、实验成功率高和重复性好等病理生理学实验教学改革的目的,加深了学生对肝性脑病发病机制的理解,培养了学生的临床思维能力,收到满意的教学效果。

摘要：目的结合特定案例,设计基于生物信息学的医学基础课程,以加深学生对所学知识的理解,提高学生的综合素质。方法该文以医学生《生理学》授课过程中涉及的知识点作为出发点,设计授课方案,通过知识点引入、知识点延伸、前沿研究实例讲解、讲解与演示、学生分组讨论与现场实操环节进行授课。结果该授课方案在介绍与该知识点相关的国际前沿最新进展的基础上,对文献中涉及的主要生物信息学分析方法进行示例分析、讲解与结果解读。让学生具备基础医学专业知识的同时培养其国际视野,将人才培养与社会需求相结合。通过这一系列学习不仅扩展了学生在相关问题上的知识储备,而且培养了学生发现问题、分析问题和解决问题的科研能力。通过课程学习,激发了学生对临床和科研工作的兴趣,让学生在未来工作中从实际出发,敬业奉献。结论该文设计的授课方案从医学生的专业背景入手,以学生为中心,将基础理论知识、临床需求、科研进展与方法学分析相结合,加深学生对医学基础知识的理解,激发学生的探索欲和求知欲,提高学生的综合能力。

摘要：目的制备黄连素-白及多糖-羧甲基壳聚糖复合敷料(BBCCD),并评估其物理性能及药效。方法采用真空冷冻干燥法制备BBCCD。根据孔隙率、吸水率、透气率筛选最佳处方配比。通过扫描电子显微镜观察所制备的BBCCD的微观结构,抑菌圈法评价其抑菌效果,CCK-8法检测其细胞毒性。将新西兰兔血液样本随机分为医用纱布组、明胶海绵组、BBCCD组,通过体外凝血实验评价BBCCD的凝血效果(n=6)。将72只SD大鼠随机分为医用纱布组、明胶海绵组和BBCCD组,通过大鼠股静脉、肝脏及断尾止血实验分析止血时间(n=8);将54只SD大鼠随机分为空白组、壳聚糖敷料组和BBCCD组,采用伤口愈合率(n=6)和血清IL-1β、TNF-α、IL-10水平(n=4)测定及创面病理学变化综合评价BBCCD的促愈合效果。结果BBCCD中5%白及多糖溶液与5%羧甲基壳聚糖溶液的最佳体积比为1∶3。BBCCD为膜性海绵状多孔结构,无明显毒性,可吸收创面渗液而产生强黏附性,黄连素含量为(52.39±0.87)mg/g,对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均有抑菌效果。BBCCD组的体外凝血指数、股静脉创伤止血时间、肝脏创伤止血时间、断尾止血时间均优于明胶海绵组和医用纱布组(P均<0.01)。在皮肤创面修复的第3、5、7、14天,BBCCD组大鼠的伤口愈合率均高于壳聚糖敷料组和空白组(P均<0.05)。在皮肤创面修复的第7、14天,与壳聚糖敷料组和空白组相比,BBCCD组大鼠血清IL-10水平均升高,IL-1β、TNF-α水平均降低(P均<0.05)。病理结果显示,BBCCD在伤口愈合的初期可促进新生肉芽组织和毛细血管的生成,减少炎症反应,加速创面愈合。结论所制备的BBCCD性质稳定,具有良好的抑菌、止血及促创面愈合效果。