摘要：实验教学是病理生理学课程中的重要组成部分,可以帮助学生从整体水平直观地了解疾病,深刻地理解发病机制。肝性脑病实验教学是病理生理学实验教学中的重要内容之一,但是以往的教学中存在着手术操作繁琐、造模成功率不稳定、与临床结合不紧密等问题,笔者通过对该实验的教学内容与课堂实施的重新设计与改进,达到了紧密结合临床、学生自主参与度高、实验成功率高和重复性好等病理生理学实验教学改革的目的,加深了学生对肝性脑病发病机制的理解,培养了学生的临床思维能力,收到满意的教学效果。

摘要：目的结合特定案例,设计基于生物信息学的医学基础课程,以加深学生对所学知识的理解,提高学生的综合素质。方法该文以医学生《生理学》授课过程中涉及的知识点作为出发点,设计授课方案,通过知识点引入、知识点延伸、前沿研究实例讲解、讲解与演示、学生分组讨论与现场实操环节进行授课。结果该授课方案在介绍与该知识点相关的国际前沿最新进展的基础上,对文献中涉及的主要生物信息学分析方法进行示例分析、讲解与结果解读。让学生具备基础医学专业知识的同时培养其国际视野,将人才培养与社会需求相结合。通过这一系列学习不仅扩展了学生在相关问题上的知识储备,而且培养了学生发现问题、分析问题和解决问题的科研能力。通过课程学习,激发了学生对临床和科研工作的兴趣,让学生在未来工作中从实际出发,敬业奉献。结论该文设计的授课方案从医学生的专业背景入手,以学生为中心,将基础理论知识、临床需求、科研进展与方法学分析相结合,加深学生对医学基础知识的理解,激发学生的探索欲和求知欲,提高学生的综合能力。

摘要：目的制备靶向锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)基因的干扰腺病毒。方法根据ZBTB20基因序列设计人鼠通用的干扰序列,定向克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-U6-GFP的Bam HⅠ和HindⅢ酶切位点,获得重组穿梭载体pShuttle-shZBTB20。将PmeⅠ酶切线性化的重组穿梭载体pShuttle-shZBTB20导入含有腺病毒载体pAdEasy-1的BJ5183细菌,使其同源重组产生重组腺病毒载体pAd-shZBTB20。用PacⅠ酶切线性化该重组腺病毒载体,转染293A细胞包装腺病毒颗粒,用半数组织培养物感染量(TCID50)法鉴定病毒滴度,并在人肝癌Huh7细胞和小鼠肝脏组织中验证该病毒的干扰效率。结果成功构建了人鼠通用的ZBTB20基因干扰腺病毒载体,获得高活性的ZBTB20干扰腺病毒Ad-shZBTB20,滴度为3.2×10^(10)IU/mL。该干扰腺病毒感染人肝癌细胞株96 h可使ZBTB20m RNA降低至对照的20%;小鼠尾静脉注射重组病毒(1×10^(10)VG/只)7 d后可下调肝脏内源性ZBTB20蛋白的表达,并使其靶基因甲胎蛋白mRNA表达水平升高约203倍。结论所制备的ZBTB20干扰腺病毒能有效抑制人和小鼠ZBTB20的表达及其生物学效应。

摘要：目的构建并鉴定锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株。方法本实验时间为2022-04-18至2022-11-29。设计合成针对ZBTB20基因的短发夹RNA(shRNA),构建ZBTB20干扰慢病毒载体——pHBLVZBTB20 shRNA,包装ZBTB20干扰慢病毒。将人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)接种于6 cm培养皿中,分别加入含8μg/ml polybrene和0.5 ml ZBTB20干扰慢病毒上清液的无血清培养液3 ml(实验组)和含8μg/ml polybrene和0.5 ml含无意义干扰序列的慢病毒的无血清培养液3 ml(阴性对照组)进行转染,48 h后加入嘌呤霉素(优化剂量为1.5μg/ml)以筛选转染成功的HPASMCs。采用荧光定量PCR检测两组ZBTB20 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测两组ZBTB20,采用免疫组化试验检测两组ZBTB20表达情况,并进行细胞增殖实验和细胞迁移实验。结果实验组ZBTB20 mRNA相对表达量、ZBTB20均低于阴性对照组(P<0.05)。免疫组化试验结果显示,ZBTB20在阴性对照组的细胞核内高度表达,而在实验组的细胞核内无明显表达,表明ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株构建成功。感染后第2~5天,实验组细胞计数少于对照组,OD值低于阴性对照组(P<0.05)。感染后48 h,实验组划痕愈合面积百分比低于阴性对照组(P<0.05)。结论本实验成功构建了锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株,且ZBTB20敲低后HPASMCs的增殖和迁移能力明显受到抑制。

摘要：为贯彻习近平主席在全军院校长集训开班式上强调的新时代军事教育方针,深化院校教育改革创新,培养德才兼备的高素质专业化新型军事医学人才,通过部队调研和查阅资料自编特殊环境生理学教材,在临床医学八年制专业开设特殊环境生理学课程。经过两年多的教学实践,通过教材认可度、课程建设、授课模式和实用性及为军服务等四个维度对学员进行问卷调查,分析问卷调查的结果并探讨相应的教改措施。以期发现问题,评估教学质量、优化教学方案,激发学员学习兴趣,进一步提高教学质量。

摘要：翻转课堂这一概念的提出已将近30年,特别是近些年来随着新媒体在教学实践中的广泛应用,使得翻转课堂这一教学模式被越来越多的师生所认可。相比于传统教学模式,翻转课堂更加注重学生自主学习能力的培养,改变了师生在传统教学过程中的定位。课堂教学在培养学生创新能力上存在一定的局限性,第二课堂活动对于培养学生创新能力具有课堂教学无法比拟的优越性。本文拟对医学本科生第二课堂教学中存在的问题进行分析,阐述医学本科生第二课堂教学中进行翻转课堂的优势以及设计思路,探析翻转课堂在医学本科生第二课堂教学中的作用,为医学本科生第二课堂教学模式创新提供参考和借鉴。

摘要：目的:对小鼠内源性NPC1L1蛋白进行标记和示踪,为研究体内胆固醇的吸收机制提供新的技术手段。方法:利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,针对小鼠NPC1L1基因的3′末端非编码区,设计不同sgRNA,利用细胞内的荧光素酶法,检测分析其Cas9/sgRNA核酸酶活性,筛选出高活性的sgRNA序列,经体外转录制备sgRNA和Cas9 mRNA。PCR扩增基因打靶的两侧同源臂,与FLAG-EGFP的编码cDNA一起克隆至打靶载体。经酶切和测序鉴定正确的打靶载体DNA与sgRNA、Cas9 mRNA一起显微注射入小鼠受精卵,移植至假孕小鼠体内自然发育;通过基因组DNA的PCR和Southern印迹分析,筛选、鉴定重组正确且无随机插入的子代小鼠。制备小肠组织冰冻切片,荧光显微镜下观察NPC1L1-EGFP的表达分布。结果:成功构建了NPC1L1基因敲入打靶载体,筛选了高活性的sgRNA,利用CRISPR/Cas9技术获得了对内源性NPC1L1蛋白C端进行FLAG和EGFP双重标记的子代小鼠,荧光显微镜下观察到该融合蛋白分布于小肠绒毛上皮细胞的刷状缘,与NPC1L1的分布特征一致。结论:成功实现了对小鼠内源性NPC1L1蛋白进行体内标记,为研究NPC1L1囊泡转运和胆固醇吸收机制提供了有效手段。