摘要：目的针对I型胶原α1(I)链设计、构建人鼠同源的Ⅰ型胶原siRNA(COL1A1-siRNA)及其表达载体,并证实其有效性。方法利用软件设计人鼠完全同源的一对Ⅰ型胶原siRNA序列,并构建其表达载体。直接将I型胶原siRNA和构建的质粒转染至大鼠系膜细胞,利用RT-PCR方法观察对系膜细胞I型胶原蛋白表达的抑制作用。结果Ⅰ型胶原siRNA转染至大鼠系膜细胞后,与空白对照组及MOCK组比较,能够抑制Ⅰ型胶原的表达。其质粒对Ⅰ型胶原表达的抑制作用更加显著,呈剂量依赖性。结论所设计的Ⅰ型胶原siRNA为人与大鼠完全同源的siRNA序列,所有碱基完全匹配。可以成功转染到大鼠系膜细胞,并有效抑制I型胶原在细胞内的表达。质粒载体的方法同样能够抑制Ⅰ型胶原的形成,而且表达更稳定,作用更显著。

摘要：目的研究针对结缔组织生长因子(CTGF)的小干扰RNA(siRNA)对高糖诱导大鼠系膜细胞(RMC)合成血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的抑制作用。方法取体外培养的RMC接种于含不同浓度的葡萄糖的6孔板中,设计并合成针对CTGF的siRNA(CTGF siRNA)并转染至高糖环境刺激的RMC中。利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CTGF mRNA及PAI-1 mRNA在RMC中的表达,利用western blot法检测CTGF蛋白质及PAI-1蛋白质在RMC的表达。结果随着培养液中葡萄糖浓度的升高PAI-1 mRNA及PAI-1蛋白质在RMC中的表达明显增加,转染CTGFsiRNA后,明显减少。结论 CTGFsiRNA能明显抑制高糖诱导的RMC合成PAI-1。

摘要：目的吻合口内膜增生可导致自体动静脉内瘘失功,本研究拟在设计大鼠模型研究其进程及机制。方法SPF 级wistar 大鼠,行右颈总动脉-颈内静脉端端吻合,术后14,28 天处死,取近吻合口静脉、动脉组织,行 HE 染色,弹力、胶原纤维的双重组合染色,PCNA、TGF- β 1、NF- κ B 免疫组化。结果内瘘吻合术后 14 天近吻合口静脉端见明显的内膜增生,呈息肉样增生,其中平滑肌细胞增生活跃,大量胶原纤维沉积,28 天管腔明显狭窄。特殊染色见术后 14、28 天近吻合口静脉内弹力层不连续。PCNA、NF- κB在近吻合口静脉壁中膜和外膜高表达,在14 天达到一个高峰,在28 天观察期内仍持续高表达。TGF- β1 在外膜基质高表达。结论大鼠右侧颈总动脉-颈内静脉端端吻合可模拟内瘘局部血流动力学的影响,短期内可见明显内膜增生等病理表现,是一种合适的自体动静脉内瘘动物模型,显示TGF- β1,NF- κB参与了内瘘内膜增生病理过程。

摘要：目的建立一种新型的体外胆管灌注系统模型，探讨各种胆管内试验在这种模型里进行同质对比研究的可行性。方法设计一种10个样品试验区的体外胆管灌注系统模型，将生理盐水、甘油和猪胆汁分别放入这种模型里，将第一个样品区的流量设定在8滴／min，在0．5、1．0、1．5、2．0、12．0和24．0h末收集并测量这种模型的10个样品区流出的液体量，评估这些液体量在每一个时间点是否相等。10种含依地酸二钠不同含量的、相同规格的缓释药棒分别放人这种模型的试验区，在注入这些液体后，在24．0h末收集并分析这10个试验区的依地酸二钠浓度，评估它们是否相等。同时，评估这3种液体对同一种药物缓释棒是否相等。结果在相同时间点，流经10个样品试验区的生理盐水、甘油和猪胆汁是相等的，差异无统计学意义（P〉0．01）；但是对于同一种液体，依地酸二钠浓度在24．0h末不同（P〈0．01）；对于同一种药物缓释棒，不同的液体也有差异（P〈0．01）。结论这种模型能够获得相同流量和实验环境，当做不同的实验时能够在不同的试验区获得不同结果，当实验环境发生改变时同一种样品的结果也会发生相应的改变，可以模拟胆管环境进行体外试验研究。