摘要：目的：筛选出人GLUT3基因有效的RNA干扰（RNA interference,RNAi）序列,并构建出慢病毒RNAi载体。方法：根据GLUT3基因mRNA序列设计合成siRNA片段4个,分别定向克隆至pLV-shRNA载体上,并将构建的质粒转染HeLa细胞,运用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测GLUT3mRNA的表达量验证其干扰效果。筛选出其中有效的质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞进行包装,收获并浓缩重组慢病毒颗粒,测定病毒颗粒滴度后,将病毒感染U251胶质瘤细胞以测定感染慢病毒干扰载体后胶质瘤细胞内GLUT3的表达情况。结果：重组RNAi质粒pLV-shRNA-GLUT3-1,pLV-shRNA-GLUT3-2,pLV-shRNA-GLUT3-3,pLV-shRNA-GLUT3-4经测序证实质粒载体构建成功;4个干扰质粒在HeLa细胞中均可以明显抑制GLUT3-mRNA的表达。pLV-shRNA-GLUT3可以在293T细胞中成功包装。收集293T细胞分泌的病毒上清浓缩后测定病毒颗粒LV-GLUT3滴度为1.5×10^9TU/mL。与感染阴性对照慢病毒颗粒（0.3641±0.044）相比,胶质瘤U251细胞感染慢病毒颗粒LV-GLUT3后,GLUT3蛋白相对表达明显降低（0.108±0.016,t=16.267,P〈0.001）。结论：成功构建了人GLUT3基因有效的慢病毒RNAi载体,为进一步研究GLUT3的生物学功能奠定了基础。

摘要：背景：对于嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的疗效目前尚无共识，或许单一细胞移植可能并不是修复脊髓损伤的最佳选择。如何选择适当的干预手段予以联合应用，并使之实现从实验室走向临床应用是细胞移植策略中的重点问题。目的：探讨大鼠嗅鞘细胞移植与督脉电针联合应用修复大鼠脊髓损伤的可行性。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007—08／2008—08在清华大学二附院脑神经病研究所实验室完成。材料：成年雄性Wistar大鼠70只，取10只用于制备嗅鞘细胞，剩余60只随机分为4组：模型对照组、嗅鞘细胞移植组、督脉电针组、联合组，15只／组。方法：各组大鼠均建立脊髓全横断模型。造模后暴露脊髓，嗅鞘细胞移植组、联合组向填入脊髓横断处的明胶海绵内缓慢注射唉鞘细胞悬液10μL；模型对照组、督脉电针组同法注射等量DMEM-F12培养液。从造摸成功后第2天开始，替脉电针组、联合组动物接受1次/d的督脉电针治疗，选大椎穴（DU14）、命门穴（DU4）进行针刺，针刺深度5mm，大椎穴接正极，命门穴接负极，电针15min，电针频率20Hz，持续脉冲电流12-15mV，连续7d为1个疗程，疗程间隔2d。主要观察指标：造模后BBB运动功能评分的变化，脊髓诱发电位检测结果。结果：各组动物均成活10周。与模型对照组比较，造模后4-10周嗅鞘细胞移植纽、督脉电针纽，联合组BBB运动功能评分均明显升高（P〈0．05），且联合组升高幅度明显高于嗅鞘细胞移植组、督脉电针组（P〈0．05）。与模型对照组比较，造模后4。10周嗅鞘细胞移植组、督脉电针组、联合组波幅电压明显升高（P〈0．05或P〈0．01），反应潜伏期均明显降低（P〈0．05或P〈0．01），且联合组差异变化尤为显著。嗅鞘细胞移植组与督脉电针组各指标之间比较无明显差异（P〉0．05）。结论：嗅鞘细胞移植和督脉电针联合应用可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生，改善其肢体运动功能。

摘要：目的探讨多排螺旋CT血管造影(MSCTA)对降低颅底脑膜瘤手术创伤的应用价值。方法对32例颅底脑膜瘤患者术前行MSCTA检查,观察瘤体的形态及其与邻近大血管、颅底骨质的三维关系;利用三维重建图像模拟手术操作,以术中所见为标准对照。同时随机抽取未接受MSCTA检查的22例颅底脑膜瘤患者作为对照组,比较两组的术中输血量和并发症的发生率。结果32例患者MSCTA皆清晰显示瘤体的形态及其与邻近大血管、颅底骨质的三维关系,与术中观察一致,通过模拟操作皆合理地设计了骨瓣的大小及形状,有效避免了瘤周重要血管的损伤,准确地评估了包裹动脉剥离的危险度,其中9例改变了常规手术入路和手术方式,4例术前早期制定了次全切手术方案及放疗计划。与对照组比较,患者术中输血量明显减少(P<0.05),术后并发症发生率也降低。结论MSCTA可以从多角度模拟手术操作,为术前制定手术方案提供重要信息,从而减少手术创伤和术后并发症。

摘要：目的总结颅脑穿透伤的诊治经验。方法回顾性分析2016年1月以来成功救治的5例颅脑穿透伤的临床资料,并结合文献进行分析。结果5例均获得良好预后,ADL评分95分以上,未出现颅内感染、出血、癫痫等并发症。结论正确认识异物及其进入颅内的途径,巧妙地设计手术入路,利用非功能区彻底地清创,运用颅底重建技术,联合、足量应用抗生素预防感染是成功救治颅脑穿透伤的关键。

摘要：目的探讨p65对神经胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及相关机制。方法构建p65真核表达载体p IRES2-Zs Green1-p65,设计合成p65基因特异RNA干扰序列si RNA-p65,培养胶质瘤细胞U87,并将p IRES2-Zs Green1-p65、si RNA-p65转染到U87细胞内(对照组分别转染p IRES2-Zs Green1与si RNA-NC),采用Western blotting检测各组细胞中GLUT-3的表达变化;Transwell小室检测胶质瘤细胞U87侵袭能力的变化;CCK-8检测U87细胞增殖能力的变化。结果与转染p IRES2-Zs Green1组相比,转染p IRES2-Zs Green1-p65可以增加p65蛋白与GLUT3蛋白的表达,并增强U87细胞增殖与侵袭能力(P<0.05);与转染si RNA-NC组相比,用si RNA-p65沉默p65基因表达,可以下调P65与GLUT-3基因蛋白水平的表达,并减弱U87细胞增殖与侵袭能力(P<0.05)。结论 p65可以通过调节GLUT-3基因的表达,抑制神经胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。

摘要：目的:克隆大鼠葡萄糖转运体3(glucose transporter 3,GLUT3)基因启动子区,并构建其萤火虫荧光素酶报告基因载体。方法:在对大鼠GLUT3基因5′侧翼区进行详尽生物信息学特征分析后,设计相应引物,用PCR的方法从大鼠基因组中扩增出GLUT3基因5′侧翼区-1037～155bp段长为1 292bp的启动子区(以翻译起始点ATG为+1),再用定向克隆的方法将这一启动子区片段定向重组入专门用于启动子活性研究的萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-basic)中,构建出包含大鼠GLUT3基因启动子区的萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-GLUT3),电泳与测序鉴定,最后再将pGL 3-GLUT3与内参pRL-TK用脂质体转染的方法瞬时共转染PC12和原代培养的神经元中,通过双荧光素酶报告基因检测系统鉴定pGL 3-GLUT3的启动子活性,并用独立样本t检验方法进行统计分析。对照组共转染pGL3-basic与内参pRL-TK。结果:构建出荧光素酶报告基因载体pGL3-GLUT3。与转染空质粒pGL3-basic组相比,原代神经细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性升高(5.182 9±0.264 8 vs 2.893 1±0.775 4,P=0.008),在PC12细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性也升高(2.797 7±0.512 0 vs 1.179 8±0.312 5,P=0.010)。结论:成功克隆GLUT3基因启动子区,并构建出包含GLUT3基因启动子片段的荧光素酶报告基因载体,并且在PC12和原代培养的神经元中pGL 3-GLUT3可以表现出启动子活性。这为后续大鼠GLUT3基因转录调控研究提供研究素材。

摘要：目的探讨利鲁唑对戊四氮(PTZ)致癫痫大鼠海马CA3区白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法将45只大鼠按完全随机设计方法分为对照组、癫痫模型组(PTZ组)和利鲁唑组(Riluzole组),每组15只;造模大鼠连续给予PTZ(35 mg·kg-1·d-1)腹腔注射30 d,3次Ⅳ级或以上发作大鼠为癫痫造模成功;免疫组织化学法检测各组大鼠海马CA3区IL-1β、TNF-α的表达和分布。结果对照组、PTZ组及Riluzole组大鼠的IL-1β阳性细胞平均光密度值(OD)分别为(0.210±0.002)、(0.241±0.002)和(0.220±0.002),不同组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α阳性细胞OD值分别为(0.191±0.003)、(0.230±0.003)和(0.202±0.003),不同组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);大鼠海马CA3区IL-1β与TNF-α表达水平呈显著正相关(r=0.969,P<0.01)。结论利鲁唑通过抑制癫痫大鼠脑内神经细胞过度表达IL-1β、TNF-α,可能降低其对正常神经细胞的损伤作用,可能减缓癫痫发病对正常神经细胞的损伤,产生神经保护作用。

摘要：目的:探讨多排螺旋CT血管成像(MSCTA)在设计大型脑膜瘤个性化手术方案中的应用价值。方法:对146例直径>5cm的脑膜瘤患者术前行MSCTA检查,利用三维重建图像模拟手术操作设计个性化手术方案,包括手术入路、手术术式、全切方案及术前栓塞治疗与否,以术中所见为标准评价手术方案合理性。结果:通过MSCTA模拟操作后146例患者均合理设计了个性化手术方案,其中MSCTA显示19例颅内重要动脉明显阻碍手术操作窗而改变了常规入路途径,50例瘤体模拟单纯入路由于基底较宽或入路远侧瘤体暴露困难而改为联合扩大术式,35例瘤体侵及视神经、脑干走行区或包裹颅内重要动脉提示全切风险大而术前早期制定了次全切手术方案及放疗计划,14例窦旁脑膜瘤因窦腔闭塞而制定瘤体及静脉窦全切方案,42例富血供瘤体行术前颈外动脉栓塞治疗。术中所见与模拟操作所遇情况高度一致,瘤体暴露充分、合理,有效避免了颅内重要血管、神经功能区及静脉窦的损伤,降低了并发症的发生率,瘤体切除范围理想。结论:通过MSCTA模拟手术操作可充分、准确了解术中情况,评估手术方案的合理性和风险度,协助临床医生术前制定最佳治疗方案。

摘要：研制了一种牙科用骨粉预混加压充填器,利用本充填器,可根据实际需要吸入血液/生理盐水,并定量添加骨粉预混后加压充填。该设计在不需要占用额外调拌装置的同时,改善了传统的多个仪器输送的繁琐程序。根据实际情况需要,能提高骨粉的利用率、方便医生操作、增加患者舒适度,为未来新型材料的应用和先进技术的发展,提供了应用前景。