摘要：为建立一种可降低PCR假阴性的槟榔隐症病毒(areca palm velarivirus 1,APV1)检测方法,参考已报告的槟榔引物保守基因,设计槟榔内标准物引物和APV1引物,槟榔内标准物引物合成3对,APV1引物合成2对,进行PCR扩增筛选槟榔内标准物引物和APV1引物。运用双重PCR扩增方法,优化反应参数。内标准物引物和APV1引物的最适引物浓度比为1:4,内标准物引物终浓度为0.2μmol/L,APV1引物终浓度为0.8μmol/L,最适退火温度为54℃,最适循环次数为30次。灵敏度结果表明,槟榔cDNA浓度稀释到10^(-6)时,仍能扩增出目的条带。特异性结果显示,只有槟榔能检测到内标准物和APV1扩增出的目的条带。利用建立的双重PCR检测方法,对海南省万宁市的40份槟榔样品进行了检测,发现有25份样品感染APV1。本研究结果可为降低槟榔潜隐病毒PCR假阴性提供理论依据。

摘要：基于NCBI数据库公开的茶树‘舒茶早’(Camellia sinensis var.'Shuchazao')全基因组序列,通过MISA在线分析工具挖掘SSR位点,并使用Primer 3.0软件批量开发设计引物,随机挑选引物检测有效性,采用荧光标记毛细管电泳技术验证筛选多态性较高的引物。结果表明,茶树全基因组中共挖掘659053个SSR位点,相对丰度212个/Mbp。二核苷酸重复类型数量最多(469096个,占比71.18%)、长度最长(8725988 bp,占比61.34%)、出现频率最高(151.06个/Mbp)、密度最大(2809.97 bp/Mbp),三核苷酸重复类型数量(99716个,占比15.13%)、长度(2801472 bp,占比19.69%)、出现频率(32.11个/Mbp)、密度(902.14 bp/Mbp)均次之。6个串联重复的SSR基序类型最多(146844个,占比22.28%),7个串联重复的SSR基序类型数量次之(87136个,占比13.22%)。从200对随机引物中筛选出137对引物可以扩增成功,其中82对可能存在多态性,使用8个茶树栽培品种进行筛选验证,其中22对引物具有多态性,其等位基因数(Na)、有效等位基因数量(Ne)、香农遗传多样性信息指数(I)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、固定指数(F)、多态性信息含量(PIC)平均值分别为5.091、3.387、1.347、0.591、0.675、0.122、0.634,筛选出的引物中有20对高度多态性信息引物(PIC>0.5)、2对中度多态性信息引物(0.4<PIC<0.5),引物多态性丰富。通过茶树全基因组序列批量开发多态性SSR标记引物,可为茶树种质资源分子鉴定、品种权保护及辅助育种提供技术参考。

摘要：为获得高效文昌锥扦插外源激素配方、明确不同外源激素对文昌锥插穗生根过程的影响,本研究采用正交试验设计方法,研究不同外源激素配比对文昌锥插穗的成活率、生根率、愈伤组织产生面积和产生率以及一级不定根数量等形态建成指标的影响。结果表明,不同外源激素配比处理间在生根率和一级不定根数量中差异极显著,而在存活率和愈伤组织产生率中差异不显著;经综合比较,处理A7(1000 mg/L萘乙酸+1000 mg/L吲哚丁酸+1.0 mg/L 2,4-D+2.5 mg/L复硝酚钠)效果最佳,成活率达86.57%,愈伤组织产生率达75.56%,生根率最高达83.27%,一级不定根数量为12.21条。极差分析表明,供试的四种外源激素对文昌锥扦插生根形态建成指标的影响差异显著。吲哚丁酸对存活率、愈伤组织产生率和一级不定根数量产生影响较大;复硝酚钠对生根率影响最大,萘乙酸、吲哚丁酸和2,4-D对生根率的影响一致;而2,4-D对愈伤组织产生面积影响最大,其次是萘乙酸和吲哚乙酸,复硝酚钠最小。研究分析认为,在植物扦插中不同外源激素的混合使用效果较好,同时在生产中应重视复硝酚钠的使用。

摘要：成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)已成为一种有价值的基因组编辑工具,能够在特定选择的位点改变DNA序列,可以在作物基因组的靶点位置精确地实现删除、替换或插入特定序列,引入理想的目标性状。该工具具有简单、高效、成本低以及功能强大等特性,在柑橘、葡萄、香蕉和草莓等果树中已实现多种类型的应用,包含产生白化表型、调控童期和花期、调控果实品质以及创造矮化和抗病虫害品种等。综述了CRISPR/Cas9系统及其作用过程,介绍了新开发的精准编辑技术,包括单碱基编辑器、引导编辑及CRISPR/Cpf1多基因编辑系统,并详细阐述了CRISPR/Cas9系统在果树基因组编辑中的应用进展,包括果树种类、目标基因及目标性状等,归纳了CRISPR/Cas9系统实现高效编辑所遇到的遗传转化和再生体系、脱靶效应和启动子选择问题,最后提出了不断优化遗传转化和再生体系、合理选择靶位点和设计sgRNA、植物内源启动子及新编辑技术的解决策略。

摘要：为了研究化肥减量配施生物有机肥对香蕉产量及品质的影响,为香蕉生产提供科学施肥方案,采用单因素完全随机区组试验设计,以目前海南当地香蕉化肥施肥量(氮300 g、磷120 g、钾600 g)为施肥对照(TK),不施肥为空白对照(CK),比较化肥减量0%(T1)、20%(T2)、40%(T3)、60%(T4)配施生物有机肥6 kg/株对香蕉产量、产量构成因素、品质和经济效益的影响。结果表明,T1~T3处理分别较TK处理产量提高31.98%、26.31%和12.67%,T1和T2处理间产量无显著性差异;T2处理较TK处理显著增加果指长4.13%、果指围6.08%、单果质量10.89%、收获率14.29%。与TK处理相比,化肥减量配施生物有机肥处理均能显著提高果实糖酸比12.60%~30.84%,化肥减量40%以内能显著提高香蕉果实的可食率和维生素C含量,且T2处理显著提高可溶性固形物含量5.50%。与TK处理相比,T1、T2处理总利润分别增加83.09%和69.55%、产投比分别提高12.65个百分点和10.78个百分点。综上可知,化肥减量20%配施生物有机肥6 kg/株有利于协调香蕉产量构成各因素,提高香蕉产量、品质和经济效益。

摘要：本研究基于茄子自交系WT和L6-5重测序数据设计SNP特异引物,通过对反应体积、DNA用量和引物浓度等参数进行优化,建立了茄子PARMS(Penta-primer amplification re-fractory mutation system)SNP分型体系。研究结果表明最佳反应体系为6μL,其中1μL DNA模板(10~100 ng/μL),3μL PARMS mix(2×),0.45μL引物混合物(100μmol/L),1.55μL ddH2O。利用WT和L6-5的F2群体验证该体系的稳定性,获得了较好的SNP分型结果。本研究建立的PARMS-SNP分型体系,为开展茄子种质资源遗传多样性分析、基因定位、指纹图谱构建和分子标记辅助选择等提供了技术支持。

摘要：bHLH转录因子在高等植物生长发育、激素应答和次生代谢调节中具有重要的功能。根据巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)HbbHLH1基因设计了2个特异性反向引物,利用Genome Walking方法从巴西橡胶树叶片基因组DNA中克隆获得了HbbHLH1基因起始密码子上游819bp的调控片段。序列分析表明,该片段除了含有一个典型的真核生物核心启动子区域(-60～-10bp)外,还含有多个TATA-box、CAAT-box等启动子元件以及多种与激素和胁迫诱导相关的顺式调控元件,其中在-290bp和-309bp位点分别有一个应答Me-JA信号反应的调控元件,但没有发现典型的乙烯响应元件。这暗示了HbbHLH1转录因子可能在橡胶树乳管分化和胶乳生物合成中具有调控作用。

摘要：LUT5 (Lutein deficient 5)负责编码类胡萝卜素羟化酶CYP97A3,参与类胡萝卜素羟基化。为研究LUT5对香蕉果肉类胡萝卜素的调控,本试验以Pilose香蕉叶片为模板,根据NCBI预测的香蕉LUT5序列设计引物进行克隆,并对蛋白质结构进行分析。结果显示,克隆出的MaLUT5 CDS区全序列长为1 971 bp,编码656个氨基酸;MaLUT5蛋白为亲水性不稳定酸性蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,定位于叶绿体外膜。对Pilose香蕉各个组织进行RT-qPCR检测,结果显示MaLUT5基因具有很强的组织特异性,且在生殖器官的表达水平高于营养器官。此外,对转pBI121-Ma LUT5拟南芥进行GUS组织化学染色分析,结果显示MaLUT5能在拟南芥全株表达。经过完全黑暗处理后,LUT5在AAA基因型中的表达量显著提升,而在BBB基因型的表达量下降。在Pilose变黄的果实中瞬时超表达MaLUT5,MaLUT5表达量和总类胡萝卜素含量显著提高,编码ε-羟化酶CYP97C1的LUT1 (Lutein deficient 1)表达量变化不显著。综上,初步推断LUT5在AAA基因型香蕉果肉类胡萝卜素途径起正调控作用,能促进类胡萝卜素形成。本研究为阐明MaLUT5功能、分子育种培育高类胡萝卜素香蕉提供理论基础。

摘要：为降低芒果常温贮藏的黑斑发生率和腐烂率,减缓营养物质流失,延长货架期,本实验制备了单宁酸-漂白紫胶复合保鲜剂,以单宁酸和漂白紫胶的质量分数作为响应变量,芒果的质量损失率和黑斑发生率作为响应值,通过响应面Central Composite试验设计对单宁酸-漂白紫胶天然保鲜剂进行配方优化,并检测了复合保鲜剂的理化指标。结果显示,单宁酸-漂白紫胶复合保鲜剂对芒果常温贮藏有明显的保鲜效果,确定了最优配比为漂白紫胶7.3%(质量分数,下同)和单宁酸0.3%,贮藏第18天,芒果质量损失率和黑斑发生率分别为24.38%和29.91%,与空白对照组相比,该最优配比复合保鲜剂减缓了芒果中可滴定酸、可溶性糖、可溶性固形物和抗坏血酸等营养成分的流失,抑制芒果腐烂,使芒果的贮藏货架期至少延长了8 d;且该复合保鲜剂的各项感官和理化指标,包括黏度、灼烧残渣、总砷和铅含量等均符合国家标准,说明此保鲜剂绿色、安全、无毒。

摘要：开发霍山石斛简单重复序列(SSR)分子标记,为霍山石斛遗传多样性和种质资源鉴定的研究提供技术支撑。利用Illumina HiSeq X10平台对霍山石斛叶片进行转录组测序,Microsatellite(MISA)软件分析霍山石斛转录组SSR的分布频率和重复基元的类型特征,软件Primer 5设计引物。从202080条Unigene中搜到43291个SSR位点,分布在36382条Unigene序列中,发生频率为18.00%,平均每6.08 kb含1个SSR位点,共有463种重复基元,单核苷酸重复占主要地位,发生频率为47.62%,在所有重复基元中,A/T出现频率最高(47.06%)。试验共获得13960条SSR引物。