摘要：为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CSFV的5′UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Man探针,并进行反应体系优化,敏感性、特异性验证,建立了同时检测上述4种病原的四重实时荧光定量PCR。结果显示,所建立的四重荧光PCR扩增效率(E)、相关系数(R^(2))及曲线斜率均在正常范围内,检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2 E值、R^(2)、斜率分别为92.9%、0.998、-3.504,90.7%、0.998、-3.566,94.3%、0.996、-3.466,94.2%、0.997及-3.470。PRRSV、CSFV、PRV、PCV2重组质粒最低检出限分别达到10^(2)、10^(2)、10^(2)、10^(3) copies/μL;四重qPCR反应体系中的多条引物间不发生交叉反应,经评价该方法特异性良好;批内和批间重复性试验结果显示,变异系数(CV)均在1%以下,具有良好的重复性。分别使用该方法和相应的国标荧光定量检测法对采集的298份临床样品进行检测对比,两种方法检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2阳性符合率分别为96.08%、96.38%、100%、94.95%,均在94%以上。结果表明,建立的检测方法方便、灵敏、高效、特异性强,适用于猪呼吸道疾病病原学、流行病学研究以及临床病例的诊断,并为猪呼吸道疾病的预防和控制提供技术支撑。

摘要：根据GenBank公布的ORF7基因保守序列设计了特异性引物,建立了PRRSVORF7基因反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)荧光法快速检测方法。结果表明,RT-RAA荧光法在42℃、20min内即可检测到PRRSV特异性扩增曲线,最低检测浓度为9.9×10^(6)copies/μL;与PRVBartha-K61、PCV、CSFV、PRRSVGD、PRRSVXH-GD、PRRSVGM2、PRRSVCH-1a病毒均无交叉反应。分别对157份样品进行荧光RT-RAA法与PCR方法的检测进行比对,结果显示,荧光RT-RAA法敏感性为94.0%,特异性为100%。建立的PRRSV荧光RT-RAA法操作简便,特异性强,灵敏度高。

摘要：本研究针对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF2a基因序列,设计特异性RAA引物和标记探针,通过反转录酶与重组酶扩增结合,旨在建立一种高效检测PRRSV的基于侧流层析试纸条的可视化RT-RAA方法。结果,建立的RT-RAA-LF方法的最佳反应条件是39℃恒温扩增10 min,可在2 min内实现对检测结果的可视化判定;该方法特异性强,仅对PRRSV出现阳性扩增,对本研究中其他病原均无交叉反应;以含PRRSV ORF2a基因全段序列的重组质粒作为模板,RT-RAA-LF的检出限为160 copies/μL。应用建立的RT-RAA-LF方法对临床采集的160份样本进行检测,与PCR方法进行比较,两种方法的符合率为96.8%(65/68),一致性检验为χ2<3.84,在95%的置信区间内没有显著性差异,当中3份临床样品在PCR检测中为阴性。综上,基于PRRSV ORF2a建立的RT-RAA-LF方法操作简单,对仪器设备要求不高,能够高效且直观的实现临床检测,满足现场检测的要求,对猪养殖场快速诊断和防控PRRSV具有重要意义。

摘要：本试验旨在研究环境高温与饲粮粗蛋白质（CP）水平对28 ～ 42日龄肉鸡生产性能、氮代谢和氮排放的影响.试验选取576只爱拔益加肉鸡,采用2因子3水平试验设计：因子1为饲养方式,设有23℃恒温自由采食组（23℃ad libtum group,23℃AL组）、23℃恒温配对组（23℃pair-fed group,23℃PF组,其饲粮按照28/32℃日变高温自由采食组采食量供给）、28/32℃日变高温自由采食组（28/32℃ad libtum group,28/32℃AL组,28℃-32℃-28℃日变循环高温）;因子2为饲粮CP水平,设21.19％、18.18％、14.90％3个水平,通过补充人工合成必需氨基酸（EAA）,使各组饲粮蛋氨酸、赖氨酸、苏氨酸、色氨酸水平满足肉鸡营养需要,且保持一致.试验分为9组,每个组设8个重复,每个重复8只鸡.结果表明：1）相同饲粮CP水平下,28/32℃AL组体重（BW）、平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFI）均显著低于23℃AL组（P＜0.01）,但与23℃PF组差异不显著（P＞0.05）.与23℃AL组相比,28/32℃AL组氮利用率显著降低（P＜0.01）,单位采食量氮排放量显著增加（P＜0.05）.2）补充人工合成EAA,饲粮CP水平从21.19％降低到14.90％,肉鸡的单位体增重氮排放量、单位采食量氮排放量均显著减少（P＜0.01）,氮利用率、BW、ADG、ADFI均无显著变化（P＞0.05）.由此可知,在日变循环高温条件下,肉鸡生产性能、氮利用率显著降低,氮排放量显著增加;补充人工合成EAA,饲粮CP水平降低到14.90％可以减少氮排放量而不影响肉鸡的BW、ADG、ADFI.

摘要：为获得屯昌猪MYLPF基因的CDS区序列并分析其分子结构特征,研究屯昌猪、杜洛克猪以及其杂交F1代猪不同组织中的MYLPF mRNA表达水平,本研究以GenBank上公布的猪MYLPF基因序列(登录号:NM001006592)为参考设计引物,通过RT-PCR扩增、测序获得屯昌猪MYLPF基因CDS区。结果显示:该基因CDS区长度510 bp,编码169个氨基酸,在CDS区存在33 G>T的同义突变;该基因编码产物既没有跨膜结构,也不存在信号肽,属于非分泌型蛋白,主要在细胞质中发挥作用,预测存在1个潜在的糖基化位点和9个磷酸化位点,α螺旋区域在预测的二级结构中占比最大。荧光定量PCR检测结果显示MYLPF基因在屯昌猪背最长肌中表达量最高,屯昌猪背最长肌中MYLPF mRNA的表达量均显著高于杜洛克猪及其杂交F1代猪。本研究为探明MYLPF基因对猪肌内脂肪的影响提供了分子理论依据。

摘要：本试验采用5×2完全随机试验设计,5个维生素A(VA)添加水平(0、2500、5000、10000IU/kg和15000IU/kg),2个维生素E(VE)添加水平10mg/kg和100mg/kg,360只1日龄北京鸭随机分为10个处理组,研究不同水平VA、VE对北京鸭生产性能的影响。结果表明,VA的添加可显著提高北京鸭生长前期的平均日增重和平均日采食量(P0.05),VE水平对北京鸭前期生产性能无显著影响(P>0.05);建议北京鸭生长前期VA的适宜添加量为5000～10000IU/kg,VE为10mg/kg。

摘要：[目的]克隆五指山小型猪生长激素释放激素(GHRH)受体基因的cDNA,并对其进行序列分析。[方法]以五指山小型猪耳组织提取的基因组RNA为模板,根据已报道的猪GHRHR cDNA序列设计3对引物,用RT-PCR方法进行cDNA扩增。PCR产物经回收纯化后,与pMD18-T连接并转化大肠杆菌DH5α,转化产物经PCR和双酶切鉴定后筛选出阳性克隆,阳性克隆经LB液体培养基培养鉴定后测序。[结果]成功获得了五指山小型猪GHRH受体基因的cDNA,该片段长1 577 bp,编码423个氨基酸。BLAST分析结果表明,该片段与猪GHRH受体基因仅有23个碱基的差异,同源性为98%;而两者GHRH受体基因均由423个氨基酸组成,序列同源性为96%。[结论]该研究为进一步揭示五指山小型猪的矮小机理提供了理论依据。

摘要：为研究日粮粗纤维水平对生长中期定安鹅腿肌MSTN基因表达量及肌纤维发育的影响,选遗传背景相近、体重一致的30日龄定安鹅120只,采用单因子随机试验设计,共分3个处理组,每处理组设4个重复,每重复10只鹅。分别饲喂粗纤维水平为4.29%,5.29%和6.29%的三种日粮。试验期为35 d。结果表明:(1)日粮粗纤维水平为5.29%时,可以提高生长中期定安鹅试验末重和平均日增重,并且与6.29%组比较达到了显著水平(P<0.05);(2)日粮粗纤维水平可以显著影响生长中期定安鹅腿肌中MSTN的基因表达量(P<0.05),且腿肌中MSTN的基因表达量与生长中期定安鹅的试验末体重和平均日增重呈负相关关系;(3)日粮粗纤维水平为5.29%时,与6.29%组相比可显著提高生长中期定安鹅血清中Ig A和Ig G的含量(P<0.05);(4)日粮粗纤维水平显著影响生长中期定安鹅腿肌纤维数量和腿肌纤维密度的影响(P<0.05)。综上所述,日粮粗纤维水平为5.29%可以显著影响生长中期定安鹅的试验末体重、平均日增重和腿肌中MSTN基因的表达水平,对腿肌纤维的发育也有一定的促进作用。

摘要：胡椒为胡椒科胡椒属植物胡椒的干燥近成熟或成熟果实,既是重要的香辛料,也是一味传统的中药,在世界范围内广泛应用,具有温中散寒、下气、消痰的功效。胡椒中主要含有以胡椒碱为主的酰胺类生物碱和以单萜、倍半萜类化合物为主的挥发油成分,具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗炎、降糖、抗抑郁等广泛的生物活性。笔者通过查阅、整理国内外近5年有关胡椒的文献资料,对胡椒果实、梗、叶、花等不同部位所含化学成分以及药理作用的相关研究进行总结和分析,发现其作为药食同源的中药具有良好的药物开发潜力,可为胡椒的后续研究和深度利用提供参考。

摘要：为获得屯昌猪丙酮酸脱氢酶激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)基因的编码序列(coding sequence,CDS)并分析其分子结构特征,研究屯昌猪、杜洛克猪及其杂交F1代不同组织中的PDK4基因表达水平,本研究以Genbank上公布的猪PDK4基因序列(登录号:NM_001159306)为参考设计引物,通过RT-PCR扩增、测序、拼接获得屯昌猪PDK4基因CDS区。结果显示:屯昌猪PDK4基因CDS区长度1224 bp,相对分子质量为46170.24 u,既没有跨膜结构也不存在信号肽,属于非分泌型蛋白,主要在线粒体中发挥作用,预测存在2个潜在的糖基化位点和33个磷酸化位点,α螺旋区域在预测的二级结构中占比最大。实时荧光定量PCR检测结果显示,PDK4基因在屯昌猪背最长肌中表达量最高,且极显著高于杜洛克猪及其杂交F1代猪。