摘要：目的用基因重组技术构建LV3-人类EGFL7基因的小发卡RNA(LV3-h EGFL7-shRNA)慢病毒表达载体。方法设计靶向h EGFL7-shRNA序列,建立LV3-h EGFL7-shRNA,在慢病毒载体p GLV3/H1/GFP+Puro中放置h EGFL7-shRNA基因片段,DNA测序以及酶切的方式进行检测h EGFL7片段,转染293T细胞后对上清液进行浓缩,最后在对病毒滴度进行检测。结果 EGFL7-shRNA核苷酸链有正确的插入顺序,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为2×108TU·m L^(-1)。结论 h EGFL7-shRNA慢病毒表达载体构建成功,鉴定可满足试验需求。

摘要：目的：构建人类表皮生长因子域7（EGFL7）基因RNA干扰（RNAi）重组慢病毒表达载体。方法：参照小分子干扰RNA的设计原则,应用Oligo Designer 3.0软件设计三条靶向人EGFL7基因的RNA干扰序列（hEGFL7-RNAi）,并将其分别插入含有绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pLV3中,获得重组质粒,与包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE和pMD2G共同转染293T细胞,包装产生重组慢病毒,培养72 h后,应用qRT-PCR检测慢病毒感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后靶基因mRNA的水平,以评价其基因沉默效果。结果：筛选出3条人EGFL7基因的RNAi序列,分别包装出重组慢病毒,其滴度分别为1×10^8、2×10^8和5×10^8TU/mL,将其转染入HUVEC后,EGFL7mRNA表达均受到明显抑制（P〈0.05）。结论：成功筛选出三条针对人EGFL7基因的RNAi有效靶序列,并成功构建重组慢病毒表达载体,证明该序列可沉默HUVECs中EGFL7基因的表达。