摘要：为了克隆马尔他布氏杆菌M 5-90株divK基因并对其进行原核表达,根据GenBank中M5-90株divK基因序列,设计了1对引物;以此菌株的基因组为模板,用设计的引物扩增出了372 bp的基因片段。用凝胶回收纯化目的基因片段,并将其与pMD 20-T载体连接,转化大肠杆菌(***)DH 5α后测序;测序正确后将此基因片段克隆到pET-28a(+),构建重组质粒pET28a(+)-divK;然后,把构建好的重组质粒转化入*** BL 21(DE3)。1 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western-blot分析的结果表明,诱导表达的蛋白与目的蛋白的大小一致,说明本研究成功构建了pET28a(+)-divk原核表达载体,并在*** BL21中成功表达了divK基因。

摘要：基因打靶技术是研究基因功能的重要手段,而基因打靶效率特别是体细胞的打靶效率非常低下。人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)是目前正在研究的提高打靶效率的方法。文中综述了这2种方法的基本原理、设计思路及在提高基因打靶效率中的应用,并对2种方法的特点进行了分析比较,最后对其未来发展进行了展望。