摘要：目的用基因重组技术构建LV3-人类EGFL7基因的小发卡RNA(LV3-h EGFL7-shRNA)慢病毒表达载体。方法设计靶向h EGFL7-shRNA序列,建立LV3-h EGFL7-shRNA,在慢病毒载体p GLV3/H1/GFP+Puro中放置h EGFL7-shRNA基因片段,DNA测序以及酶切的方式进行检测h EGFL7片段,转染293T细胞后对上清液进行浓缩,最后在对病毒滴度进行检测。结果 EGFL7-shRNA核苷酸链有正确的插入顺序,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为2×108TU·m L^(-1)。结论 h EGFL7-shRNA慢病毒表达载体构建成功,鉴定可满足试验需求。

摘要：背景:研究提示,烟碱对帕金森病小鼠具有神经保护效应,临床试验也观察到,帕金森病患者在吸烟过程中其震颤、僵直、运动减少等症状减轻,但其作用机制目前尚不明了。目的:观察烟碱对大鼠脑纹状体多巴胺D1,D2受体mRNA表达的影响,分析烟碱对帕金森病神经保护效应的作用机制。设计:完全随机分组设计,对照试验。单位:中南大学湘雅医院神经病学研究所。材料:选用健康雄性清洁级SD大鼠24只,10周龄,体质量180～200g。主要试剂及仪器:烟碱(美国Sigma公司)、反转录试剂盒(美国MBI公司)、聚合酶链反应热循环仪(美国Beckman)、全自动紫外分光光度计(美国BeckmanDu-70)、图像分析处理系统(美国StratageneEagleEyeⅡ型)。方法:实验于2001-07/2002-07在中南大学湘雅医院神经病学研究所实验室完成。①按随机抽签法将大鼠随机分为2组:对照组、烟碱组,每组12只。分别皮下注射生理盐水、烟碱溶液4mg/(kg·d),2次/d,共14d。注射药物后0.5h观察大鼠行为活动,包括定型活动、走动活动、攀爬行为、旋转行为、理毛行为、张口行为、呕吐行为等,观察时间为0.5h。②于末次注射药物后0.5h处死动物,快速分离纹状体,提取总RNA,采用美国MBI反转录试剂盒反转录cDNA,在特定条件下进行聚合酶链反应扩增,将电泳凝胶在EagleEyeⅡ图像处理系统上分析计算出多巴胺D1,D2受体及内对照β-actin吸光度(A值),检测大鼠脑纹状体多巴胺D1,D2受体mRNA的表达。③两样本均数比较采用t检验。主要观察指标:①大鼠行为学改变。②大鼠脑纹状体多巴胺D1,D2受体mRNA的表达。结果:大鼠24只均进入结果分析。①烟碱组大鼠于用药第3天,出现走动增多,易激惹,定型活动明显,并于第7～14天达到高峰;对照组则无明显变化。②大鼠脑纹状体所有标本总RNAA260/280均>1.8,经12g/L琼脂糖浆电泳显示无明显降解;通过反转录聚合酶链反应和设定的引物,得到多巴胺D1,D2受体及actin的扩增产物分别为350bp,399bp,218bp,与预计值一致。③在大鼠纹状体内,烟碱组多巴胺D1受体mRNA表达比对照组上升23%(分别为98.63±1.13,65.29±1.45,P0.01)。结论:烟碱可能通过上调大鼠纹状体多巴胺D1受体mRNA的表达而诱导大鼠行为改变。

摘要：目的：构建人类表皮生长因子域7（EGFL7）基因RNA干扰（RNAi）重组慢病毒表达载体。方法：参照小分子干扰RNA的设计原则,应用Oligo Designer 3.0软件设计三条靶向人EGFL7基因的RNA干扰序列（hEGFL7-RNAi）,并将其分别插入含有绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pLV3中,获得重组质粒,与包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE和pMD2G共同转染293T细胞,包装产生重组慢病毒,培养72 h后,应用qRT-PCR检测慢病毒感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后靶基因mRNA的水平,以评价其基因沉默效果。结果：筛选出3条人EGFL7基因的RNAi序列,分别包装出重组慢病毒,其滴度分别为1×10^8、2×10^8和5×10^8TU/mL,将其转染入HUVEC后,EGFL7mRNA表达均受到明显抑制（P〈0.05）。结论：成功筛选出三条针对人EGFL7基因的RNAi有效靶序列,并成功构建重组慢病毒表达载体,证明该序列可沉默HUVECs中EGFL7基因的表达。

摘要：在ICU有20%-30%的患者有意或无意地拔除治疗或监测管道，给治疗带来严重干扰，故对危重患者合理使用约束带十分必要。为此，我们设计制作了手约束垫，并应用于ICU烦躁不安、意识不清、不合作等患者，收到了良好效果，现介绍如下。