摘要：目的对比Xpert MTB/RIF与改良罗氏比例法药敏试验检测利福的平药敏结果。方法选取2019年7月—2022年4月淮安市第四人民医院住院或者门诊中同时进行Xpert MTB/RIF和改良罗氏比例法药敏试验检测利福平药敏的246例肺结核患者为研究对象,比较两种方法检测利福平的药敏情况。结果Xpert MTB/RIF和改良罗氏比例法药敏试验检测利福平的耐药率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.15,P>0.05)。比例法药敏试验检测敏感,Xpert MTB/RIF耐药有8例;比例法药敏试验检测耐药,Xpert MTB/RIF敏感0例。246份标本经Xpert MTB/RIF检测出利福平耐药有36例,在结核杆菌RRDR设计ProbeA、ProbeB、ProbeC、ProbeD、ProbeE 5条探针中,Xpert MTB/RIF系统检测利福平耐药位点以ProbeE最高63.9%。以改良罗氏比例法药敏试验为金标准Kappa=0.86。结论Xpert MTB/RIF检测利福平的药物敏感性用时短,高通量,灵敏度高,特异度高。

摘要：目的:检测微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)在CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)中的表达水平,同时构建基于慢病毒的miR-126反义寡核苷酸序列(antisense oligonucleotides,ASOs)表达载体。方法:实时定量PCR特异性探针法检测miR-126在Tregs中的表达水平;针对miR-126序列,设计合成其ASOs序列,退火后连接至经AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶双酶切的pGCsil-LV-GFP载体上,连接产物转化DH5α感受态细胞,对经PCR鉴定为阳性的载体(命名为pGCsil-miR-126-ASOs)进行测序分析;将构建成功的pGCsil-miR-126-ASOs表达质粒和pHelper 1.0、pHelper 2.0质粒共转染293T细胞,浓缩病毒颗粒并测定所获病毒滴度;将制备好的病毒颗粒感染经TGF-β体外诱导培养的小鼠CD4+CD62L+初始T细胞,72 h后用流式细胞仪检测其Foxp3的表达变化。结果:实时定量PCR结果显示miR-126在CD4+CD25+Tregs中的表达明显高于CD4+CD25-T细胞(P<0.01);测序结果证明成功构建pGCsil-miR-126-ASOs重组质粒载体,包装并获得高浓度的慢病毒颗粒,病毒滴度为9×108TU/mL;重组的病毒能明显抑制Tregs的外周诱导(P<0.05)。结论:成功构建miR-126 ASOs的慢病毒表达载体,并获得高浓度的病毒颗粒。