摘要：设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。

摘要：新菠萝灰粉蚧(Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley))是我国进境植物检疫性有害生物,新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧(***)经常从进口菲律宾和东南亚水果中截获,用形态学方法对二者进行鉴定较难,且耗时较长。为了对这两种粉蚧进行快速准确鉴定,本研究利用mtDNA COI基因设计了两组特异性引物和MGB探针,应用TaqMan实时荧光PCR方法实现了对新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧进行快速准确鉴定的目的。该方法耗时短,重复性好,适合在口岸检疫中推广应用。

摘要：火蚁属(Solenopsis)是一类具有重要经济意义的害虫,其中红火蚁(*** Buren)和黑火蚁(*** Forel)为国际上关注的检疫性害虫。在本研究中,利用mt DNA COI基因设计了3组特异性引物探针,应用实时荧光PCR方法实现了对红火蚁、黑火蚁及近似种热带火蚁的快速准确鉴定。

摘要：给排水系统的消毒处理部分是植物隔离检疫温室生物安全性的重要保障,可防止有害生物随水发生逃逸,或产生交叉污染,对于保证试验的可靠性、准确性以及确保生态安全具有重要的意义。本文根据负压型植物隔离检疫温室的特点设计了给排水系统,其消毒处理部分采用砂石沉淀、活性炭、反渗透、超滤、紫外和臭氧等多种方式消毒处理有害生物,初步建立了给排水系统的生物安全评价指标。试验检测结果表明,消毒处理部分可有效处理全部有害生物,符合实验室生物安全要求。

摘要：空气过滤器可防止有害生物随气体传播或逃逸,是植物隔离检疫温室生物安全性的重要保障。本文根据负压型植物隔离检疫温室的特点,设计了送排风子系统的空气过滤器布局方案,选择了可耐高温、高湿、阳光直射、紫外线和农药消毒处理的空气过滤器。经过一年的隔离检疫实际操作。经检测,送排风子系统的空气过滤器对隔离种植的各类有害生物的过滤效果达到99.99%,符合"实验室生物安全通用要求"国家标准的生物安全性要求。该温室空气过滤器的布局方案可为同类型植物隔离检疫温室建设提供有益的借鉴。

摘要：研究小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白生物学活性,为建立PPRV抗体检测方法提供材料。根据GenBank已发表的PPRV H蛋白质序列,设计上、下游引物,以PPRV核酸为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆至pET52/LIC载体中,构建了pET52/LIC-PPRV H表达载体。将pET52/LIC-PPRV H重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳分析,可见PPRV H蛋白成功得到了表达,融合蛋白的分子质量约为75ku,Western blot分析表明所表达的重组蛋白可与PPRV阳性血清发生特异性反应,说明表达的PPRV H蛋白可以作为建立PPRV抗体检测的蛋白。

摘要：伪狂犬病是世界范围内严重影响养猪业发展的重要动物疫病,快速检测是有效防控该病的重要措施之一。为了建立该病的快速分子生物学检测方法,根据GenBank中登录的伪狂犬病病毒gD基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光PCR反应条件进行优化,建立了用于检测伪狂犬病病毒的实时荧光PCR方法。特异性试验结果表明,该检测方法只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.42pg/μL的总DNA,与PCR方法的灵敏度对比试验表明,其敏感度比PCR至少高10倍。对同一样品进行重复性检测,在组内及组间检测的荧光扩增曲线基本重叠,证实其重复性好。对180份临床样品进行伪狂犬病病毒核酸检测,结果发现有52份阳性样品。结果表明,所建立的实时荧光PCR方法可对伪狂犬病病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性好的优点,是开展伪狂犬病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。

摘要：根据3种转基因棉花品系的边界序列设计品系检测引物,建立了一种特异性检测转基因棉花品系MON531、MON1445和MON15985的多重PCR-DHPLC方法。以20种不同的转基因及非转基因作物DNA验证该方法的特异性,结果只有MON531、MON15985和MON1445有特异的品系扩增片段峰,而其他转基因和非转基因作物无品系扩增片段峰,表明该方法特异性强。灵敏度实验结果表明3种转基因棉花的检测下限均为1 ng,灵敏度高。建立的方法可用于转基因棉花MON531、MON1445和MON15985品系及含有其成分产品的筛查或定性检测。

摘要：根据菜豆晕疫病菌的一段特异促旋酶亚组B（gyr B）基因序列,设计锁式探针和扩增引物,优化体系反应条件,建立了基于锁式探针菜豆晕疫病菌滚环扩增特异性检测体系。试验结果表明该检测体系能够从供试菌株中特异性检测出菜豆晕疫病菌。该体系检测DNA的阈值为600 fg/μL,与传统PCR相当;检测菌悬液检测阈值1.3×10~3 cfu/m L,比传统PCR高10倍,在模拟样品检测中也显示了更适合于样品的检测。

摘要：目的:建立对水产品中三种双链DNA病毒(斑点叉尾鮰病毒、锦鲤疱疹病毒、流行性造血器官坏死病毒)快速、敏感、特异的检测方法。方法:针对三种病毒的DNA聚合酶基因的保守序列设计三对特异性引物和三条Taqman探针,优化体系,建立三重荧光定量PCR体系,并对该方法的灵敏性和特异性评估。结果:建立的三重荧光定量PCR体系特异性强,引物之间及引物和探针之间无相互干扰。对三种病毒的检测限均能达到102拷贝/μL。结论:该方法体系稳定,重复性好,可操作性强,对水产品中的双链DNA病毒的快速检测具有重要的应用价值。