摘要：为建立一种灵敏性高、特异性强、可自动化检测犬猫弓形虫的分子学诊断方法,本研究提取弓形虫RH虫株DNA,以致密颗粒蛋白7(GRA7)基因保守区为靶标,设计特异性引物并构建标准质粒pMD18-GRA7,以标准质粒pMD18-GRA7作为模板,建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR(real-time PCRor qPCR)检测方法。结果显示,该方法特异性引物只能扩增出弓形虫DNA样品,对阴性样品及其他犬猫寄生虫阳性样品DNA则未见扩增曲线。所建qPCR方法的检测下限为3 copies,当标准品浓度为3 copies/μL时,检测Ct值为29.4。对犬猫临床样品进行检测,并与商品化试剂盒结果相比校,阴阳性符合率达100%。上述结果表明,本研究建立的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性好,敏感性强,结果稳定,可用于犬猫弓形虫病的临床检测。

摘要：目的:建立鹦鹉热衣原体的荧光定量PCR检测方法。方法:根据鹦鹉热衣原体incA基因序列设计高特异性、高保守性的引物和Taqman-MGB探针,通过灵敏度、特异性、重复性研究以及临床样本验证,建立鹦鹉热衣原体的荧光定量PCR检测方法,并与WOAH推荐的鹦鹉热PCR检测方法进行比较。结果:本方法对鹦鹉热衣原体检测均为阳性,对沙眼衣原体、流产衣原体、禽流感病毒、新城疫病毒、禽白血病病毒、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的扩增均为阴性;本方法的最低检测浓度为51.2copies/μL,扩增效率为95.79%;本方法的重复性变异系数为0.26%~0.69%;对临床样本检测结果对比WOAH推荐方法,Kappa值为0.904,具有较强的一致性。结论:本研究建立的鹦鹉热衣原体荧光定量PCR检测方法稳定性好、特异性强以及灵敏度高,可应用于鹦鹉热的临床诊断与流行病学研究等工作中。