摘要：目的　扩增弓形虫主要表面抗原 (SAG2 )编码基因片段并进行重组表达。方法　设计合成 1对引物 ,从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因序列 ,以低熔点琼脂糖回收纯化 ,并以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切、纯化后 ,再插入表达载体 pGEX - 4T - 2 ,经PCR和双酶切筛选 ,测序验证后 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并用SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　从弓形虫核酸提取物中扩增出约 477bp的SAG2基因 ,构建成功了重组质粒 pGEX - 4T - 2 -SAG2 ;SAG2基因在大肠杆菌中得到高效表达。SDS -PAGE电泳 pGEX - 4T - 2 -SAG2的融合蛋白条带的分子量约为 42kD ,Westen -blot显示融合蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论　GST融合表达载体的构建和SAG2基因片段成功表达 ,为进一步为SAG2重组疫苗及重组诊断抗原的研制奠定了基础。

摘要：目的　根据弓形虫表面抗原SAG2基因序列 ,设计弓形虫特异性引物一对 ,采用聚合酶链反应技术 ,进行弓形虫感染的检测。结果　从弓形虫DNA提取物中扩增出 5 93bp的基因片段 ,与预期的扩增片段大小相符 ;与弓形虫亲缘关系相近的三株恶性疟原虫、间日疟原虫、利什曼原虫和正常人全血核酸抽提物经扩增后均未见特异性的扩增条带 ;该检测体系至少可检测出相当于每 μl血样中 2个弓形虫的水平 ;将该检测体系用于临床孕妇产前诊断 ,5 6份标本中检查出 3例。结论　所建立弓形虫PCR检测体系灵敏、特异 ,适用于孕妇弓形虫感染的诊断。

摘要：目的：体外扩增间日疟原虫（深圳株）红内期小亚单位核糖体核糖核酸编码基因（SSUrDNA）片段，克隆测序分析，并探讨其诊断应用。方法：设计1对特异性引物，采用聚合酶链反应（PCR）从间日疟患者血样中扩增出间日疟原虫SSUrDNA片段；用PUC19质粒T载体构建重组子导入大肠杆菌JM109；阳性克隆双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列；以SSUrDNA为靶基因，PCR诊断间日疟，双盲法检测40份血样（28份镜检阳性的血样，12份健康血）。结果：间日疟原虫SSUrDNA扩增片段大小约为341bp；阳性克隆双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段；序列测定插入片段为341bp，与SalI株顺序相比，仅在第151位处缺失1个碱基C；以SSUrDNA为靶基因，双盲法检测镜检阳性及健康人血样，结果完全正确。结论：所克隆的间日疟原虫SSUrDNA片段序列在间日疟原虫虫株间高度保守，以其为靶基因建立的PCR检测方法适用于间日疟的诊断。

摘要：目的　构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体 ,并在Vero细胞中表达。　方法　设计 1对引物 ,从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因 ,构建 pVAX1 SAG2真核表达重组质粒。以限制性内切酶KpnⅠ和EcoRⅠ进行双酶切、PCR鉴定 ,纯化后进行测序鉴定。脂质体介导法瞬时转染Vero细胞 ,同时以 pVAX1为对照 ,48h后收集细胞 ,Western blot鉴定。　结果　从弓形虫RH株DNA中扩增出了 5 77bp的SAG2基因 ,构建了真核表达载体 pVAX1 SAG2 ,在质脂体介导下转染Vero细胞 ,质粒DNA成功的转染到细胞中。通过Westen blot分析 ,细胞裂解液样品有 1条可被弓形虫免疫血清所识别的约 17ku大小的条带 ,与预计大小一致。　结论　真核表达载体pVAX1 SAG2在Vero细胞中有一定表达 ,且有一定的活性。

摘要：本文对恶性疟原虫环子孢子蛋白 ( circum sporozoite protein,CSP)基因片段进行克隆和序列测定。根据恶性疟原虫 837株基因编码序列设计合成一对引物 ,采用 PCR技术从恶性疟原虫 FCC- 1/HN株基因组DNA中特异扩增 CSP基因片段的 区、中央重复区、重复区后可变区和 区 ;经纯化的扩增产物用 Bam H 和 Kpn 双酶切后 ,定向克隆入大肠杆菌——分枝杆菌穿梭表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌 DH 5α,重组克隆经抗性筛选和快速凝胶电泳鉴定 ,再经 PCR和酶切鉴定 ,并对重组子进行序列测定。结果表明从恶性疟原虫 FCC- 1/HN株基因组 DNA中可特异扩增出约 1171bp的基因片段 ,阳性重组质粒经双酶切和 PCR鉴定与预期的结果一致 ,序列测定表明所克隆的基因和编码环子孢子抗原的基因片段相符。