摘要：目的建立一种新的多重PCR和反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测鲍曼不动杆菌21个主动外排基因的方法并评价其临床应用价值。方法根据GenBank中收录的多重耐药鲍曼不动杆菌AYE株5个外排泵蛋白基因家族,选取其中21个基因(4个来自MFS家族,13个来自RND家族,2个来自MATE家族,1个来自SMR家族,1个来自ABC家族)。设计22对引物及寡核苷酸探针(1对鲍曼不动杆菌通用引物及探针),mPCR同时扩增22个目的基因,PCR产物再与固定在尼龙膜上的特异性寡核苷酸探针反向线点杂交,同时检测上述22个基因。用该法对40株经过鉴定的鲍曼不动杆菌进行检测。结果除cmlA5和cmlA基因未检出阳性外,其余19个外排泵基因均呈阳性。除第16号菌株外排泵基因检测阴性外,其余39株鲍曼不动杆菌临床株携带外排泵基因数量从5～18个不等。外排系统在多重耐药菌株及相对敏感菌株中均有分布。11个外排泵基因在多重耐药鲍曼不动杆菌菌株中阳性率明显高于敏感株,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立的mPCR-RLB技术可快速同时检测鲍曼不动杆菌多个外排泵基因,短时间内明确菌株携带外排泵基因情况,对明确其多重耐药性的发生机制、避免药物成为外排泵对象、找到更有效的特异外排系统抑制剂均有重要意义。

摘要：目的:建立一种可检测常见肺炎链球菌(SP)重要血清型的多重PCR(mPCR)方法,并初步应用于临床。方法:根据SP荚膜多糖基因序列(cps)的保守序列cpsA,设计8种SP血清型特异性引物,优化PCR条件后,对SPDNA进行扩增,通过电泳分离出型特异性条带,用于检测8种已知血清型和126株未知血清型SP菌株,并与产物纯化克隆后的测序结果比对。结果:8种已知血清型SP的mPCR分型结果与传统方法分型结果及测序结果一致;mPCR可一次检测出87.50%的血液来源SP血清型和31.81%呼吸道来源SP血清型。结论:mPCR方法可快速检测8种重要SP血清型,对初筛血液来源SP血清型有较高应用价值。

摘要：目的：运用TaqMan探针法对NRG3基因rs17101655 T→G单核苷酸多态性进行基因分型，探讨rs17101655 T→G单核苷酸多态性与原发免疫性血小板减少症(ITP)的关联性，为该病的发病机制提供重要线索。方法针对NRG3基因rs17101655位点T→G多态性，设计1对PCR引物和TaqMan探针，通过实时荧光PCR扩增进行基因分型；采用病例-对照研究，对中国汉族江西地区200例ITP和200例健康对照人群进行基因分型，比较两组人群基因型分布及频率差异。结果Rs17101655位点T→G多态性的基因型和等位基因频率分布在ITP病例组和对照组中分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TaqMan探针法可快速、高效地对单核苷酸多态性进行基因分型，本研究结果显示NRG3基因rs17101655位点不作为中国汉族人群ITP的易感位点。