摘要：拟除虫菊酯类农药是一类在世界范围内被广泛用于防治害虫的神经毒剂。由于用量大且存在一定毒性,因此,研究适合现场快速检测的筛查方法对于保障消费者身心健康具有重要作用。基于抗体特异性识别的免疫分析法具有简便、灵敏、快速及低成本等特点,是当前食品安全主流快速检测方法。该文重点介绍了拟除虫菊酯类农药及其代谢物半抗原设计策略、抗体制备和免疫检测新方法等方面研究进展,并对其应用现状、存在的问题及未来前景进行了评述。

摘要：基于菊酯类农药特殊结构及现有合成菊酯半抗原的种种问题,设计一种新型合成拟除虫菊酯半抗原方法。该方法以菊酯类原药为原料,经臭氧氧化、卤代反应、维悌希反应、水解4步化学反应合成半抗原。采用该方法合成了氯氰菊酯、氯菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯半抗原,这些半抗原分别与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联,获得免疫抗原和包被抗原。用这4种免疫抗原分别免疫BALB/C小鼠,制备多克隆抗血清。采用免疫分析方法对这4种多克隆抗血清的性能进行测试,该抗血清的效价都较高,达到15000倍以上;用1 mg/L拟除虫菊酯原药进行竞争试验,除溴氰菊酯外其余抑制率均可达到50%以上。说明设计的半抗原结构和合成方法可行,为后续进一步研究提供参考。

摘要：以滴滴涕（DDT）的特征部分为基础设计并合成了半抗原4-{4-[2,2,2-三氯-1-（4-氯-苯基）-乙基]-苯基}-丁酸（DDT-H1）、4-[4-（2,2,2-三氯-1-对甲苯基-乙基）-苯基]-丁酸（DDT-H2）,并采用活泼酯法制备免疫原DDT-H1-BSA,以及混合酸酐法制备包被原DDT-H1-OVA、DDT-H2-OVA;用DDT-H1-BSA对小鼠进行免疫,通过细胞融合、筛选、克隆等步骤得到1株能稳定分泌DDT农药抗体的单克隆细胞株。细胞株经扩大培养后,注射小鼠体内产生腹水,并将其用辛酸-硫酸铵和protein A柱子纯化出单克隆抗体。其分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类为Ig G1,单抗腹水的效价为1.68×10^5,亲和力Ka为5.238×10^11L·mol^-1,与其它几种代谢物有一定的交叉反应。在此基础上,利用获得的单抗研究建立DDT的间接竞争酶联免疫吸附检测法（ic ELISA）。结果表明,所建立的间接竞争ELISA方法的线性范围（IC20-IC80）为6.6-521.8 ng/mL,可用于检测农副产品、环境中残留的DDT及其代谢物。

摘要：生物传感器技术对医疗保健、环境和食品质量控制有着重要的影响,近几年材料科学、纳米技术和仿生设计的创新使生物传感器领域的应用范围更广。本文对生物传感快速检测技术进行了探讨,以便为目标分析物的现场检测提供依据。

摘要：目的制备并鉴定环戊二烯类有机氯农药单克隆抗体。方法以环戊二烯类农药的特征部分为基础设计合成半抗原4-(4,5,6,7,8,8-六氯-3a,4,7,7a-四氢-4,7-亚甲基-1H-聚-1-氧)4-丁酮酸(CCD),并通过活泼酯法将其与载体蛋白BSA、OVA分别偶联制备免疫抗原CCD-BSA和包被抗原CCD-OVA;再经过动物免疫、细胞融合,筛选、克隆,得到1株能稳定分泌环戊二烯类农药抗体的单克隆细胞株。细胞株经扩大培养后,注射小鼠体内产生腹水,并将其用辛酸-硫酸铵和protein A柱子纯化出单克隆抗体。结果 用间接ELISA方法测定其效价为2.5×104,亲和力Ka为6.7×1010L/mol;以β-硫丹为竞争物,采用间接竞争ELISA法建立标准曲线,测得其IC50为16.2 ng/m L,LOD为2.1 ng/m L,定量检测线性范围为4.7~117.5 ng/m L,与其他5种结构类似物的交叉反应率高于10%。结论 本研究成功获得了抗环戊二烯类农药单克隆抗体,该抗体可实现果蔬中环戊二烯类农药的多残留快速检测。

摘要：目的构建大肠杆菌O157∶H7、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌5种主要食源性致病微生物毒力基因重组质粒载体并鉴定其表达产物,为探讨高通量磁性荧光纳米颗粒标记相应的抗体技术快速检测带毒力基因的致病微生物的可行性奠定基础。方法分别从5种食源性致病微生物毒力岛中选择特异性的毒力基因进行引物设计,分别提取5种目的细菌DNA片段,经PCR扩增、电泳回收目的基因片段,将目的基因片段与原核表达载体pET-23a、pET-28a、pET-32a构建各自的重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒载体,构建后的重组质粒进行酶切和测序鉴定,再转化入表达宿主E·coliBL21(DE3)。在0.1 mmol/L的IPTG诱导下,目的质粒载体在E·coliBL21(DE3)株中表达,SDS-PAGE电泳检测表达蛋白。结果实验成功构建大肠杆菌O157∶H7、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌等细菌的毒力基因重组质粒载体pET-23a-eaeA、pET-28a-tdh、pET-28a-enterotoxin B、pET-32a-invA和pET-28a-ipaH,并克隆出969 bp的eaeA基因片段、567 bp的tdh基因片段、798 bp的enterotoxin B基因片段、1 041 bp的invA基因片段和771 bp的ipaH基因片段。重组质粒载体经酶切和测序与目标基因序列一致。在E·coliBL21(DE3)株中有质粒表达蛋白37.5 kDa(eaeA)、26 kDa(tdh)、34.5 kDa(enterotoxin B)、41 kDa(invA)、32 kDa(ipaH)。结论本研究成功构建了5种食源性致病微生物毒力基因重组质粒并在原核细胞中高效表达,为下一步获得相应的毒力基因抗体及快速诊断试剂的研制应用奠定了基础。