摘要：目的建立一种快速准确诊断禽流感病毒 H7N9型的实时荧光定量 RT-PCR检测方法。方法参照国家生物技术信息中心（NCBI）公布的 H7N9基因 HA序列，设计特异性引物及TaqMan探针；构建阳性重组质粒，验证其最低检测拷贝数、重复性及特异度。结果试验构建的阳性重组质粒，线性关系在6＆#215;102 copies／μl～6＆#215;108 copies／μl范围内检测结果良好；用该方法测得最低拷贝数为600 copies／μl，特异度和重复性（CV＜1％）良好，无交叉反应；用该荧光定量 RT-PCR检测方法检测8份阳性样品和8份阴性样品，准确率为100％（16／16）。结论实验建立的实时荧光定量 RT-PCR检测方法可用于禽流感病毒 H7N9型的快速检测。

摘要：目的研制一种能同时检测EV71，CA16肠道病毒的二联实时荧光定量PCR检测试剂盒，主要用于EV71，CA16肠道病毒的快速检测和流行病学监测。方法设计特异度的EV71型、CA16型基因的引物和探针，优化实时荧光定量PCR检测体系，并研究产品的灵敏度、精密度、稳定性和检测线性范围；同时对2014年5月份收集的26份样品进行检测。结果试验得到了阳性重组质粒，线性范围在5＊10^2 copies／μl-10^5 copies／μl，该范围内检测结果良好；优化后肠道病毒CA16上下游引物和探针浓度分别为0．48，0．24μmol／L，EV71上下游引物和探针浓度分别为0.40，0．20μmol／L。敏感度达到500copies／μl，重复性变异系数CV≤5％；该荧光定量PCR检测试剂盒稳定性强，在-20℃下可以保存一年，对EV71，CA16肠道病毒具有良好的特异度。用该方法检测20份临床阳性样品和6份阴性样品，阳性检出率为100％（20／20），阴性检出率为100％（6／6）。结论试验建立的EV71，CA16肠道病毒实时荧光定量RT—PCR检测方法可用于EV71，CA16肠道病毒的临床诊断。