摘要：[目的]分析宫颈癌免费筛查女性中生殖道沙眼衣原体(GCT)感染与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的关联性。[方法]采用横断面研究设计,选取2021年11月至2022年5月期间于深圳市罗湖区妇幼保健院参加宫颈癌免费筛查的1494名健康女性为研究对象,通过问卷调查收集研究对象的人口学资料、生活习惯、性行为史及生殖生育史。采用Logistic回归模型分析女性GCT感染与HR-HPV感染的关联性。[结果]GCT的阳性率为4.4%,HR-HPV的阳性率为11.0%。其中,GCT阳性组的女性HR-HPV阳性率(25.8%)高于阴性组(10.4%)(P<0.001)。多因素Logistic回归模型结果显示,在校正人口学资料、生活习惯、性行为史和生殖生育史后,GCT感染与HR-HPV感染存在显著关联(OR=2.80,95%CI:1.51~5.19)。[结论]女性GCT感染与HR-HPV感染有显著关联性,GCT感染的女性HR-HPV感染的可能性更大,应加强对这部分人群的预防保健、早期筛查和及时干预工作。

摘要：目的通过RNA干扰技术，构建细胞色素氧化酶（CYP）2E1基因慢病毒表达载体，研究CYP2E1基因沉默对三氯乙烯（TCE）致肝细胞毒性的影响。方法设计合成shRNA片段连接到慢病毒载体，筛选单菌落，经聚合酶链式反应（PCR）和测序鉴定后提取质粒，转导L02肝细胞中，筛选CYP2E1缺陷型细胞，利用荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法（Westernblot）鉴定干扰效果。以不同浓度（0、0．25、0．50、1．00、2．00、4．00mmol/L）TCE分别对L02肝细胞和CYP2E1基因沉默细胞染毒，测定TCE对2种细胞的存活率及IC50，应用流式细胞仪测定细胞凋亡率，采用实时荧光定量PCR检测细胞凋亡基因和癌基因mRNA表达水平。结果正常L02肝细胞对TCE的IC50为15．1mmol／L，CYP2E1沉默细胞对TCE的IC50为23．6mmol／L。随TCE剂量增加两组细胞凋亡率升高，2．0、4．0mmol／LTCE染毒剂量时，CYP2E1沉默细胞的凋亡率明显低于L02肝细胞组，差异有统计学意义（P〈O．05或P〈0．01）。TCE染毒后CYP2E1沉默细胞的抗凋亡基因Bcl-2表达水平比L02肝细胞升高15％-60％，凋亡基因caspase-3和caspase-9表达水平比L02肝细胞下降30％-60％，差异均有统计学意义（尸〈O．01）。抑癌基因p53表达水平明显高于L02肝细胞，升高81％-278％；癌基因***和k-ras明显低于L02肝细胞组，下降20％～68％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论利用慢病毒介导RNA干扰技术成功构建了CYP2E1基因沉默细胞。沉默CYP2E1基因可降低TCE对肝细胞毒性，抑制部分凋亡基因与癌基因表达，提示CYP2E1基因在三氯乙烯代谢过程中发挥重要作用，与三氯乙烯毒性存在一定关系。

摘要：目的构建CYP3A4基因沉默载体,转染L02肝细胞,建立CYP3A4沉默细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响。方法根据GenBank提供的CYP3A4基因mRNA序列设计合成shRNA,将shRNA连接到pLKO.1-puro中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到CYP3A4沉默细胞株,通过荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP3A4沉默细胞进行染毒12h,观察凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)表达变化。结果测序证明插入pLKO.1-puro载体的干扰序列与设计的序列一致,荧光定量PCR检测CYP3A4沉默细胞CYP3A4基因表达比正常L02肝细胞下降77.3%,Western blot实验显示CYP3A4沉默细胞CYP3A4蛋白表达水平比正常L02肝细胞下降84.6%。CYP3A4沉默细胞经三氯乙烯染毒后Bcl-2表达水平显著高于L02细胞的表达水平;Caspase-3表达水平无明显改变;Caspase-8仅在TCE高剂量组表达下降;Caspase-9在TCE剂量≥1.0 mmol/L表达水平下降;癌基因c-fos、c-myc、k-ras和p53表达水平都有一定程度下降,部分剂量组存在显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论三氯乙烯对正常肝细胞和CYP3A4沉默细胞凋亡基因和癌基因表达存在明显差异,提示CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系。

摘要：目的构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称"L02细胞"),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响。方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞。筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定。分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12 h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmol/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化。结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA序列一致。CYP1A2沉默细胞的CYP1A2 mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9%和82.4%(P<0.01)。TCE染毒后,0.25～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P<0.01);部分0.25～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc、k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P<0.05或P<0.01)。结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用。

摘要：目的:构建CYP1A2基因高表达载体,转染到L02肝细胞,建立CYP1A2高表达细胞株并检测三氯乙烯对该细胞株凋亡基因和癌基因的影响。方法:根据GenBank提供的CYP1A2基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒高表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到CYP1A2高表达L02细胞株,通过荧光定量PCR和Westernblot对细胞株进行鉴定。用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP1A2高表达细胞进行染毒12h,采用PCR方法检测凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)mRNA表达的变化。结果:测序证明重组慢病毒高表达载体CYP1A2基因序列与GenBank提供的CYP1A2序列一致,荧光定量PCR检测显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2mRNA表达比正常L02肝细胞提高317倍,Westernblot结果显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2蛋白表达水平比正常L02肝细胞高3.41倍。三氯乙烯染毒后,CYP1A2高表达细胞中凋亡基因Bcl-2mRNA表达水平与正常肝细胞无显著性差异(P>0.05),而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9mRNA表达水平高于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01)。CYP1A2高表达细胞中癌基因c-myc和p53mRNA表达水平低于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01),而c-fos和K-rasmRNA则高于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01)。结论:三氯乙烯对CYP1A2高表达细胞凋亡基因和癌基因表达有显著影响,提示CYP1A2是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系。

摘要：目的:应用分子克隆技术,构建CYP2E1基因过表达载体,转染L02肝细胞,建立CYP2E1过表达细胞株并进行鉴定,为深入研究环境和职业毒物的毒作用机制提供模型细胞。方法:根据GenBank提供的CYP2E1基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒过表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到转染CYP2E1基因的L02细胞,通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。结果:测序证明重组慢病毒过表达载体CYP2E1基因序列与GenBank提供的CYP2E1序列一致,荧光定量PCR检测转染CYP2E1基因的L02细胞比正常肝细胞CYP2E1 mRNA表达提高273倍,Western blot实验显示转染CYP2E1基因的L02细胞CYP2E1蛋白表达水平比正常肝细胞提高3.2倍。结论:成功构建了CYP2E1基因过表达细胞株,可应用于环境毒物和职业毒物的分子机制研究。

摘要：目的观察甲醛在低剂量水平时短期作用对细胞增殖及DNA损伤的影响,为进一步开展甲醛致体外细胞恶性转变的长期试验提供剂量设计依据。方法采用CCK-8法检测细胞活力,采用BrdU掺入法检测S期细胞比例,从而反映细胞增殖潜能,应用单细胞凝胶电泳结合紫外线照射的方法检测细胞DNA损伤程度。结果在24 h的作用时间下,当甲醛浓度在10-9~10-5mol/L范围内时可以增加细胞增殖率,提高16HBE细胞活力,而剂量达到10-4mol/L时可造成细胞死亡增多,降低细胞活力;同时当甲醛浓度超过10-6mol/L时可产生DNA损伤,在10-6~10-5mol/L表现为DNA断裂,当剂量达到或高于10-4mol/L,DNA蛋白质交联严重;甲醛在10-7~10-5mol/L浓度范围内可以显著增加S期细胞含量,从而促进16HBE细胞增殖。结论 10-6~10-5mol/L甲醛可以在造成16HBE细胞损伤的同时,干扰细胞周期、促进细胞增殖。