摘要：目的建立简易的Kidd血型抗原基因分型技术。方法设计2对引物,分别特异性针对Kidd血型基因(SLC14A1)Jka和Jkb抗原的等位基因(JKA和JKB),建立序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,基因定型Jka和Jkb抗原,初步用于检测192份无偿献血者DNA样品。全部样品均进行血清学红细胞Kidd抗原鉴定。结果建立的PCR-SSP技术检测192份DNA样品的基因分型结果均与血清学检测结果一致,样品中发现Jk(a+b-)17例(8.854%),Jk(a+b+)125例(65.104%),Jk(a-b+)50例(26.042%),未发现Jk(a-b-)个体。JKA基因频率为0.414 063(41.4%),JKB基因频率为0.585 937(58.6%)。结论成功建立Kidd血型系统抗原基因分型技术,可用于常规检测。

摘要：目的结合靶序列富集多重聚合酶链反应(TEM-PCR)、荧光探针溶解曲线SNP分型和血液直接PCR技术,建立一种方便、准确的人类血小板抗原(HPA)等位基因分型方法。方法 TEM-PCR方法设计HPA1~17、Cab这18种HPA亚型等位基因的引物及荧光探针,使用血液直接PCR酶同时扩增血液标本中的18个等位基因目标片段,并利用荧光探针的溶解温度变化区分不同SNP位点。结果 TEM-PCR可同时扩增18个等位基因的目标片段,并通过溶解峰的Tm值变化区分SNP位点,结果与序列特异性引物聚合酶链反应位点相比较有相同的准确度,且操作更为简便,无需提取血液基因组DNA,无PCR后续电泳步骤,减少污染风险。结论成功建立了1种基于TEM-PCR,血液直接PCR和荧光探针溶解曲线分析技术检测HPA1~17,Cab等位基因。

摘要：目的研究和评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA G1896A点突变的实时荧光PCR检测方法。方法收集经测序验证HBV DNA G1896A未突变的野生型样本150例和已发生突变的突变型样本58例,在突变区域设计分子信标探针,点突变处进行锁核酸处理,利用荧光PCR方法检测HBV前C区G1896A点突变;再从临床标本中随机抽取18例、8例和19例荧光PCR结果分别显示为G1896A突变的标本、杂合的标本以及野生型的标本的PCR产物进行序列测定。结果突变型质粒和野生型质粒的检测灵敏度均可以达到100copies/ml;突变型探针检测高浓度的野生型质粒时无检测信号,野生型探针检测高浓度突变型质粒时无检测信号;突变型模板在总杂合模板中的比例达到5%时则都可以将突变型检测出来;序列测定的8例G1896A突变标本、6例杂合标本和19例野生型标本的PCR产物结果和荧光PCR检测结果完全吻合。结论实时荧光PCR检测方法可以快速、简便、准确地检测HBVDNAG1896A点突变,是检测点突变的重要方法,具有重要的临床应用价值。

摘要：目的:建立BRCA1基因全长mRNA序列测定方法。方法:根据文献和GenBank(U14680)报道的BRCA1基本序列设计6对特异性引物,建立6个特异性逆转录PCR(RT-PCR)技术,分段且扩增BRCA1全长mRNA,然后采用毛细管电泳进行cDNA测序,方法建立后用于3名健康女性样本。结果:6个特异性RT-PCR反应扩增片段相互覆盖,使序列分析结果包括全长BRCA1mRNA,共5000多bp。3名经PCR技术检测确定携带正常BRCA1基因的样本的mRNA分析结果显示,其BRCA1mRNA序列均与过往报道的正常mRNA序列完全一致。结论:所建立的RT-PCR特异性结合BRCA1基因,能用于其mRNA全长序列分析。