摘要：目的建立定性检测KIR基因有无的Q-PCR方法。方法根据高分辨水平中国人群KIR等位基因的多态性,并参考国际IPD-KIR数据库,针对16种KIR基因及2DS4-Normal、2DS4-Deleted两种亚型,设计KIR基因特异性引物用于Q-PCR扩增反应;同时设置一孔阴性对照、一孔阳性对照(特异性扩增人体生长激素HGH基因片段),以监控假阳性、假阴性的结果。为验证Q-PCR方法的可靠性,随机选择302份已采用KIR PCR-SSP商品化试剂盒检测的标本,采用Q-PCR方法盲检和对比。结果300人份的Q-PCR检测结果与已知的PCR-SSP检测结果相符,有2份标本结果不一致,其中1例标本的2DS5基因Q-PCR检测结果为阴性,而PCR-SSP检测结果为阳性;另一例标本2DS1基因Q-PCR检测结果为阳性,而PCR-SSP检测结果为阴性。对2份标本分别进行2DS5、2DS1基因测序分型,证实Q-PCR定性检测结果正确。结论本文建立的KIR Q-PCR方法结果准确、可靠,可用于KIR基因有无的定性检测。

摘要：目的　调查 Rh血型 D抗原基因 ( RHD gene,RHD)阳性、D抗原阴性等位基因的家系遗传。方法　根据 RHD2 70 A等位基因序列设计 1对特异性引物 ,建立序列特异性引物 -聚合酶链反应方法 ,检测了一个 RHD2 70 A等位基因先证者的 6名家系成员 ,同时采用限制性片段长度多态性方法鉴定了全部家庭成员的 RHD基因杂合型。结果　 RHD2 70 A等位基因分别在先证者、其父亲和叔父中检出 ,但其祖母检测为阴性 ,提示该等位基因可能来源于其祖父。RHD基因杂合型鉴定显示叔父和父亲均有 1条正常的RHD基因、为 RHD2 70 A隐性携带者 ,其母亲为 RHD基因杂合型 ( RHD+ / RHD- ) ,该例 Rh基因型为RHD2 70 A/ RHD- ,从而形成 RHD基因阳性、D抗原阴性特性。结论　 RHD2 70 A等位基因为亲代遗传基因 。

摘要：以往通过基因组DNA分析,分别在高加索人和中国人中观察到少数Rh阴性个体存在RHD基因第1和第10外显子,但是该等位基因形成的具体分子机制尚有争论。分别针对RHD基因mRNA的5′和3′非编码区设计一对特异性引物,通过逆转录PCR(RTPCR)和cDNA测序,分析2例RHD基因阳性(拥有第1和第10外显子)、D抗原表型阴性个体的全长mRNA/cDNA序列,同时以1例正常Rh阳性个体(CcDDee)作对照。结果正常Rh阳性个体拥有正常RHD基因mRNA,2名携带RHD基因的Rh阴性个体则均检出存在与正常RHD基因或RHCE基因转录产物相同长度、以及相同外显子构成的mRNA,但该转录子的第1和第10外显子及3′非编码区序列与RHD基因一致,而第2～9外显子全部序列与RHCE(e)基因mRNA相同,表明2名个体均存在RHDCE(2～9)D融合RHD等位基因,即其RHD基因的第2～9外显子被同源RHCE(e)基因替换,导致不能编码正常RhD蛋白,形成个体D抗原阴性表型。

摘要：背景:移植后造血干细胞植活的判断主要依赖于体内各种遗传标记,其在敏感性和有效性方面各不相同,故亟待建立一种鉴别力强、敏感性高、不受性别限制的检测方法。目的:观察异基因造血干细胞移植供受者移植前及受者移植后不同时间段的血样DNA短串联重复序列遗传位点检测情况。设计:观察测量实验。单位:深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传重点实验室。对象:选择2004-02/2005-12在深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传实验室配型成功并进行造血干细胞移植的18对供受者血样,18例患者中,男10例,女8例,平均35岁。接受血缘关系供者移植6例,无关供者移植12例。所有受试对象均对检测项目知情同意。方法:采用荧光标记复合扩增短串联重复序列(STR)检测技术,对18例进行造血干细胞移植的血液病患者移植后的系列血样及移植前供、受者的血样进行15个STR位点和1个性别位点的检测,找出供受者间的差异基因,观察移植后供者的STR基因在受者体内的植入情况及变化过程,找出最早检测到供者STR基因的时间及完全嵌合体最早出现的时间。主要观察指标:①观察移植前供受者差异基因。②供者STR基因及完全嵌合体最早出现时间。结果:供受者18对均进入结果分析。①供受者中能区分出彼此差别的平均STR差异位点数为12.4(8～15)个。②患者移植后最早可检测到供者STR基因的平均时间为8(5～14)d,由受者型向完全供者型转化的平均时间为14(9～23)d。植入状态由供受者嵌合型转为完全供者嵌合型。结论:荧光标记复合扩增STR检测方法可精确地描述异基因造血干细胞移植植入状态及其演变过程,可为临床提供一个准确、可靠的实验依据。

摘要：背景:ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点。目的:研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。设计:随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果。单位:一所市级血液中心输血医学研究所。对象:选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血者个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁。1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科。方法:快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因。主要观察指标:260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型。结果:在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.5827,0.1846,0.

摘要：背景:脐血因所含的有核细胞数量有限,主要应用于儿童患者,近年来,人们尝试将两份脐血混合输入,用于成人血液系统疾病的治疗。目的:定量监测双份异基因脐血用于成人白血病患者移植后两份脐血的植入状态、嵌合体类型、相对数量的动态变化及演变规律。设计:以脐血干细胞移植的供受者为观察对象,供受者移植前及受者移植后不同时间段的系列血样提取DNA作为检测标本,短串联重复序列遗传位点为观察指标。单位:深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传重点实验室。对象:纳入2005-06在北京大学深圳医院住院治疗的急性髓细胞白血病患者,男性,43岁,体质量75kg。首次化疗完全缓解后6个月移植两份人类白细胞抗原(HLA)各一个位点不合的非血缘脐血,脐血1有核细胞数为2.5×107kg-1;脐血2有核细胞数为1.53×107kg-1。脐血来源于广州脐血库。患者对治疗方案知情同意。方法:采用荧光标记复合扩增短串联重复位点嵌合体定量检测技术,对急性髓细胞白血病成人患者移植两份(脐血1有核细胞数为2.5×107kg-1,脐血2有核细胞数为1.53×107kg-1)HLA各一个位点不相合的异基因脐血前后的序列血样进行了9个短串联重复序列位点的检测,利用供、受者之间的差异位点定性判断脐血是否植入以及嵌合体类型;而后根据377XLDNA测序仪上荧光扫描后两供者差异基因检出峰的峰面积计算脐血植入后患者体内两份脐血的相对数量,定量分析供体细胞植入程度及演变规律。并与采用HLA差异基因对植入状态的分析结果进行对比。主要观察指标:在成人移植双份脐血后,观察患者及两供者9个位点的短串联重复序列基因在患者体内的转变过程,对植入状态进行定量及定性的描述。结果:移植后15d两份脐血植入状态为完全双份供者嵌合体,患者体内脐血1的相对细胞数量占51.3%,脐血2占48.7%;30d时脐血1上升为70.0%,脐血2下降为30.0%。52d时只检测到脐血1的基因,植入状态转为完全单份供者嵌合体,有核细胞数少的一份脐血被排斥,有核细胞数多的一份长期植入。结论:荧光标记复合扩增短串联重复序列嵌合体定量检测可精确地描述两份脐血的植入程度及变化过程,为临床脐血的应用及供者的选择提供了一个准确、可靠的实验依据,证明双份HLA各一个位点不合的脐血同时用于成人的移植是可行的。

摘要：目的探讨建立同步扩增中国人群全部KIR基因和鉴定KIR基因有无的序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法。方法选取2015年1月至2015年11月在深圳市血液中心无偿献血的132份健康受试者的血样为研究对象。基于中国人群精细水平KIR等位基因的多态性和单核苷酸多态性(SNP)信息,参考IPD-KIR数据库,设计KIR基因特异性引物用于扩增16种KIR基因及2DS4-Normal、2DS4-Deleted 2种亚型;并采用KIR基因型已知样本,对每对PCR引物的特异性进行验证。在KIR基因的PCR扩增反应中,复合扩增人体生长激素(HGH)基因片段作为内对照,以防止PCR扩增出现假阴性结果。随机选取132份KIR基因型已知的健康受试者DNA样本进行盲检,验证该方法的可靠性。结果本研究设计和筛选出的KIR特异性引物,可鉴定相应的KIR基因,而且内对照条带和特异性扩增条带均清晰、明亮;采用本研究建立的鉴定KIR基因有无的PCR-SSP方法检测纳入研究的132份样本的盲检结果,与已知KIR基因型完全一致。结论本实验建立的KIR PCR-SSP方法,鉴定中国人群KIR基因的有无可获得准确、可靠的结果。

摘要：目的 调查Rh血型D抗原弱表现型（弱D15）等位基因的家系遗传。方法 采用常规血清学方法和PCR技术检测各家系成员Rh D、C、c、E和e抗原表型，间接抗球蛋白实验确认D抗原。依据弱D15型等位基因（RHD845A）序列设计特异性引物，建立序列特异性引物．聚合酶链反应方法（sequence specific primer-polymerase chain reaction，SSP-PCR），检测一个弱D15型先证者的4名家系成员，同时应用双管PCR技术鉴定全部家系成员的RHD基因杂合型。结果在全部4名家系成员中检出弱D15型等位基因；RHD基因杂合型结果显示4名家系成员均为RHD^＋／RHD^＋纯合型。先证者的父母、外甥均有1条正常的RHD基因，为弱D15型等位基因携带者，表现为正常D阳性；先证者和姐姐各携带2条弱D15型等位基因，基因型为RHD845A／RHD845A，形成D抗原弱表现型。结论 先证者为弱D15型等位基因纯合体，弱D15型等位基因为亲代遗传基因，非个体基因变异。

摘要：背景:选择适合的人类白细胞抗原匹配供者是实施造血干细胞移植治疗的关键,不同人种、地区和疾病人群的人类白细胞抗原与单倍型频率分布是评估地中海贫血患者选择适合供者的重要遗传学依据。目的:分析地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DRB1单倍型和表型频率分布格局,估算其与骨髓库相合供者相配的概率。设计:病例-对照分析。对象:患者组为2000-06/2006-12广东地市级以上13家医院诊断为地中海贫血的108例患者,广东籍,彼此无血缘关系。正常对照组为2000-08/2006-12中华骨髓库招募的5352名广东籍健康供者,与患者无血缘关系。方法:应用最大似然性算法计算两组人类白细胞抗原A,B,DRB1单倍型及表型频率分布。根据人类白细胞抗原单倍型遗传特征,某一个体人类白细胞抗原A,B,DRB1表型频率等于相应的基因型频率之和。在由n个供者组成的供者群体找到至少1例与患者表型全相同供者的概率P,应用公式P=1-(1-Df)n计算,Df为供者表型频率。结果:患者组和对照组最常见单倍型和表型频率分布格局不同。正常对照组常见的单倍型为A2-B46-DR9,A33-B58-DR17,A11-B75-DR12,A11-B13-DR15和A33-B47-DR13;患者组常见的单倍型为A2-B46-DR9,A33-B58-DR17,A2-B46-DR14,A11-B60-DR12和A11-B75-DR12。正常对照组常见的表型频率分布情况为A2,33;B46,58;DR9,17,A2,11;B46,75;DR9,12,A11,33;B58,75;DR12,17,A2,2;B46,46;DR9,9和A2,11;B13,46;DR9,15;患者组常见的表型为A2,33;B46,58;DR9,17,A2,2;B46,46;DR9,9,A2,2;B46,46;DR9,14,A2,11;B46,60;DR9,12和A2,11;B46,75;DR9,15。两组之间相匹配的表型有19种,表型匹配概率为0.44%(19/4282)。人类白细胞抗原A24-B51-DR8,A3-B38-DR7,A24-B50-DR12,A3-B38-DR4,A24-B51-DR8和A24-B60-DR7等34条单倍型及A2,33;B46,58;DR9,17,A2,2;B46,46;DR9,9和A2,11;B46,75;DR9,15等67种表型,其频率在正常对照组有不同程度的降低,携带有这些单倍型或表型患者找到人类白细胞抗原单倍型相合或全相合供者的概率降低。结论:地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DR单倍型频率分布呈高度遗传多态性,患者找到人类白细胞抗原全相合供者的概率取决于供者群体人类白细胞抗原表型频率。

摘要：【目的】研究ABO血型基因编码区全长序列及对疑难标本的初步应用。【方法】对6份已知ABO血型的血样进行DNA抽提,针对ABO基因启动子、所有外显子、部分内含子序列设计、合成一系列特异性引物,探索它的最佳PCR反应体系和扩增条件,获得的PCR产物直接进行序列测定。用建立的方法对2份ABO疑难血型的标本进行全长序列测定。【结果】得到ABO基因中A101、B、O01、O02、A102常见等位基因的ABO基因编码区全长核苷酸序列。疑难标本中:正定型为O型、反定型为B型的ABO基因定为O02/O21型;表型为O型的基因定为A102/O01型。【结论】建立起中国人群的ABO基因编码区全长标准序列信息库,并可运用于ABO疑难血型基因的研究中。