摘要：医学实验室的标准化、规范化、生物安全、第三方认可等管理要求的不断强化与推进,实验室内外环境本身成了检验质量全面控制的重要内容。所以,实验室的管理实际上从其规划和设计开始。为此,本文提出了医学实验室在规划设计中以规范、安全、实用、方便、环保、美观等六大理念为先导,注意和完善诸多细节。通过规范划分清洁区、缓冲区和污染区,合理布局人流、物流、气流和信息流,集中安排供电、供水、供气、供冷/供热和监控,从而达到信息化、自动化、智能化和人性化等建设目标,从而为实验室的后续使用和管理打下良好基础。

摘要：目的采用常规转染试剂难以将人β-COP-shRNA转染至THP-1细胞。构建人β-COP特异性的shRNA慢病毒载体,并测定其对靶基因β-COP的抑制效应。方法设计合成针对人β-COP基因靶点特异的4对shRNA寡聚单链DNA,插入p GMLV-SC1载体中,构建慢病毒重组载体。将重组载体和包装质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒并测定滴度。用慢病毒感染THP-1细胞,定量PCR和Western blot检测干扰载体对β-COP基因的干扰效果。结果测序证实,β-COP基因的shRNA寡聚核苷酸序列已插入慢病毒载体,转染HEK 293T细胞,经包装得到4种慢病毒,病毒滴度为1×109TU/m L。定量PCR分析显示,4种β-COP-shRNA慢病毒感染的THP-1细胞中β-COP基因mRNA表达量分别为0.831±0.065、0.675±0.079、0.260±0.050、0.497±0.067,较对照(1.000±0.000)明显升高(P<0.01);其抑制率分别为16.9%、32.5%、74.0%和50.3%。Western blot结果表明,4种干扰载体均可抑制β-COP蛋白表达,其中β-COP-shRNA 3的沉默效率为76.4%。结论成功构建了人β-COP-shRNA干扰载体,证实了干扰载体对靶基因有较好的沉默效果。

摘要：目的探讨过表达间隙连接蛋白43(Cx43)对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法选取2015年1月至2017年12月间深圳市龙岗区第三人民医院收治的31例宫颈癌患者,手术切除的经病理诊断明确为宫颈癌的组织及配对癌旁组织,采用RT-qPCR法检测宫颈癌组织及癌旁组织中Cx43的表达水平。设计过表达Cx43的慢病毒载体及阴性对照,采用RT-qPCR法检测宫颈癌细胞中Cx43的表达水平,CCK-8实验检测细胞在不同时间点的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,Caspase-3检测细胞的凋亡。结果 RT-qPCR显示,与癌旁组织相比,Cx43在宫颈癌中表达降低,差异有统计学意义(P <0. 01)。宫颈癌细胞过表达组的Cx43表达均增加,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。Cx43表达上调后,宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显下降,细胞凋亡增加,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。结论相较于癌旁组织,Cx43在宫颈癌组织中低表达。Cx43在宫颈癌中起到抑癌作用,可作为宫颈癌的治疗靶点。