摘要：RHD基因下游包括3'-端非编码区、下游Rh盒子和SMP1基因等,3'-端非编码区的具体序列目前尚不清 楚。本研究目的旨在测定3'非编码区序列。根据最近的文献报道和EMBL／GenBank／DDBJ记录的基因序列,设计 1对引物,建立聚合酶链式反应(PCR)方法,特异性扩增10名Rh阳性表型和10名D放散型(Del)表型个体的 DNA样品的RHD基因3'-端非编码区全长序列,PCR产物纯化后进行直接测序。结果表明:10份Rh阳性和10份 DelDNA样品的测定结果完全一样,显示RHD基因终止密码子与RHD基因的下游Rh盒子首位碱基之间相距103 bp,无重复序列等特殊片段;D放散型等位基因的3'-非编码区与正常Rh阳性个体一致。结论:D放散型D抗原减 弱与3'-非编码区无关。

摘要：目的结合多重聚合酶链式反应（PCR）和荧光探针溶解曲线单核苷酸多态性（SNP）分型技术,建立一种方便准确的HPA等位基因分型方法。方法针对HPA 1~5,15这6种常见的HPA亚型等位基因设计多重PCR引物及SNP探针,通过多重PCR同时扩增6个等位基因目标片段并利用荧光探针的溶解温度变化区分不同SNP位点。结果多重PCR可同时扩增6个等位基因的目标片段,并通过溶解峰的Tm值变化区分SNP位点,结果与PCR-SSP位点相比较有相同的准确度,且操作更为简便,无需PCR后续电泳步骤,减少污染风险。结论成功建立了一种结合多重PCR和荧光探针溶解曲线分析技术的HPA 1~5,15等位基因检测方法。

摘要：目的结合靶序列富集多重聚合酶链反应(TEM-PCR)、荧光探针溶解曲线SNP分型和血液直接PCR技术,建立一种方便、准确的人类血小板抗原(HPA)等位基因分型方法。方法 TEM-PCR方法设计HPA1~17、Cab这18种HPA亚型等位基因的引物及荧光探针,使用血液直接PCR酶同时扩增血液标本中的18个等位基因目标片段,并利用荧光探针的溶解温度变化区分不同SNP位点。结果 TEM-PCR可同时扩增18个等位基因的目标片段,并通过溶解峰的Tm值变化区分SNP位点,结果与序列特异性引物聚合酶链反应位点相比较有相同的准确度,且操作更为简便,无需提取血液基因组DNA,无PCR后续电泳步骤,减少污染风险。结论成功建立了1种基于TEM-PCR,血液直接PCR和荧光探针溶解曲线分析技术检测HPA1~17,Cab等位基因。