摘要：分析超速离心(analytical ultracentrifugation,AUC)技术可以记录溶液中不同聚合状态的蛋白质在离心场中的沉降运动轨迹,分析获得其沉降系数分布,进而测定自聚集平衡常数。分析超速离心-沉降速率法(AUC-SV)是分析蛋白质自聚集的经典方法,可以测量从pmol/L到mmol/L的自聚集平衡常数。该实验室与美国国立卫生研究院Peter Schuck团队合作,以常见商用蛋白β-lactoglobulin(βLGB)的同源二聚作为模型,准确测定了其自聚集平衡常数Kd。文章详细介绍了蛋白质自聚集实验中沉降速率实验设计、数据分析的操作步骤,建立了一套应用沉降速率法研究蛋白质自聚集的标准方法,并利用该方法对脱落酸(ABA)受体蛋白PYL3,以及结合ABA的PYL3的自聚集平衡常数进行测定,进一步验证了该方法的可靠性。

摘要：选取碳末端富含酸性氨基酸的拟南芥SnRK2.6(sucrose non-fermenting1-related protein kinase 2.6)和人源PDI(protein disulfide isomerase),以及近球形蛋白拟南芥PYL10 (PYR like protein 10),分别将重复酸性氨基酸序列添加到SnRK2.6(1-332)、PDI(1-440)、PYL10碳末端,利用大肠杆菌BL21重组表达,经过亲和层析,离子交换层析和分子排阻层析进行纯化,综合利用分析超速离心技术,分子排阻层析技术以及多角度静态光散射技术,研究人为设计的多聚氨基酸末端对蛋白质分子排阻行为,聚合状态和其他水力学性质的影响。结果发现,多聚酸性氨基酸末端虽不影响蛋白质分子的聚合状态,但会明显减少分子排阻色谱中蛋白质的洗脱体积,影响蛋白质分子的斯托克斯半径和轴长比等水力学性质。

摘要：大约1/3的人类遗传病与细胞中的一种复杂生命活动——剪接有关。剪接是生命信息从DNA向蛋白质传递过程中的关键一环。执行剪接任务的剪接体,更是细胞中最为复杂的分子机器。解析剪接体的结构曾经被视为“不可能完成的任务”。