摘要：目前医院检验科生化检验中手工检测已经成为历史,自动生化分析仪完成了绝大部分的工作,工作人员的重点工作是对所检验指标的方法学性能做出很好的评价,并在检测过程中采取质量控制手段。医学检验专业的临床生化检验实验课内容也理应做出相应的调整,为此我们对实验课内容作了较大的修改和补充,以适合现代临床实验室工作的要求。

摘要：通过杀菌效果试验,理化性质检测,毒性、刺激性试验和耐药试验,评价了自配复合型变色移膜革专用防霉剂的综合性能。同时设计了几种乳油配方,并对由各配方在水中的分散性进行了评估。研究结果表明:该防霉剂高效、低毒、环保、经济,对变色移膜革具有良好的综合防霉性能;几种自制乳油配方在水中具有良好的分散性。

摘要：根据GenBank中弓形虫B1基因序列,设计1对引物和1条TaqMan探针。从感染弓形虫小鼠尿液提取弓形虫总DNA,先用普通PCR扩增获得目的基因产物,将纯化的回收产物与pMD18-T载体连接,测序证实为目的片段后,制备系列浓度参照品。再优化实时荧光定量PCR反应体系,并对体系的灵敏度、重复性、线性、特异性和参照品稳定性进行评价。其灵敏度为104拷贝/ml;批内变异系数为2.42%,批间变异系数为4.18%,线性为103～107拷贝/ml,特异性为100%,参照品稳定。该法检测鼠尿样弓形虫DNA具有方便、灵敏、特异和重复性好等优点。

摘要：观察在医学检验专业中开设设计性实验的可行性和效果。在微生物学实验中选择物理因素和化学因素两个实验作为设计性实验,并由学生自行设计和操作,取得较好效果。通过开设设计性实验可以激发学生学习的主动性、积极性,有利于培养学生的团结合作和创新精神。

摘要：目的:建立一种环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)反应快速检测沙门菌的方法。方法:根据美国国立卫生研究院基因序列数据库(GenBank)上的鼠伤寒沙门菌的特异invA和fimA(登录号:M90846和M18283)基因序列,设计特异引物,提取标本DNA,然后以LAMP技术扩增invA基因,PCR方法扩增fimA基因,采用琼脂糖电泳观察结果。结果:91份血培养阳性报警瓶,LAMP和PCR法检测出阳性18份,与最终培养结果一致;30份粪便标本,LAMP和PCR法检测出阳性5份,培养阳性3份,LAMP测限达到102CFU/mL。结论:LAMP是一种简便、快速、特异和敏感的检测临床和环境标本中沙门菌的有效方法。

摘要：目的:克隆、表达恶臭假单胞菌生物降解甲苯的关键酶基因。方法:恶臭假单胞菌WZ-1在含甲苯的MS培养基中培养以鉴定其降解甲苯的能力。设计引物扩增甲苯生物降解的关键酶——甲苯双加氧酶和邻苯二酚1,2双加氧酶基因,PCR扩增目的片段后进行T-A克隆,筛选阳性克隆并鉴定。构建甲苯双加氧酶-pET28a进行体外诱导表达。结果:恶臭假单胞菌WZ-1在含甲苯的MS培养基的生长曲线证明其具有降解甲苯的能力;通过重组技术获得阳性克隆,并以酶切、DNA测序进行鉴定;IPTG诱导后获得重组甲苯双加氧酶的高表达。结论:成功获得了用于降解甲苯的甲苯双加氧酶基因和邻苯二酚1,2双加氧酶基因,并在体外诱导表达了目的蛋白,为后续利用模式生物对苯系物的生物降解建立了实验基础。

摘要：目的建立一种快速、灵敏、特异的眼源性蜡样芽胞杆菌PCR检测方法,为蜡样芽胞杆菌性眼内炎患者的快速诊断提供依据。方法选择编码蜡样芽胞杆菌细胞毒素的cytK为靶基因设计引物,建立检测眼源性蜡样芽胞杆菌PCR;PCR产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定,基因序列与GenBank比对验证扩增产物;将计数过的5株蜡样芽胞杆菌菌悬液,梯度稀释后分别提取DNA进行PCR扩增,确定检测方法的灵敏度;分别用眼部常见感染菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、化脓性链球菌、藤黄微球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌和白假丝酵母菌以及枯草芽胞杆菌DNA进行特异性试验;进一步将该方法应用到人工污染致病蜡样芽胞杆菌的房水标本中,并分析其灵敏度。结果 5株分离自眼内炎患者标本中的蜡样芽胞杆菌均扩增出360 bp左右的DNA片段,测序结果与GenBank比对一致;该法检测在5 h内完成,方法灵敏度达7.5～15.0 CFU/mL;其他菌株检测未出现非特异性扩增;对模拟感染房水标本的PCR鉴定结果与分离培养对比,二者符合率为100%,模拟标本的检测灵敏度与纯菌结果一致。结论 cytK基因为靶基因的PCR用于眼源性蜡样芽胞杆菌的快速检测,具有简便、快速、敏感、特异等特点,为眼内炎患者的快速诊断提供依据,在实际检验工作中有良好的应用前景。

摘要：目的建立环介导等温扩增（LAMP）快速检测肺炎链球菌的方法。方法根据美国国家生物信息中心（GenBank）上提交的肺炎链球菌R6株的lytA基因序列（登录号AE008540）设计特异LAMP引物，以盐酸胍-苯甲醇法提取阳性血培养瓶中细菌DNA，然后以LAMP技术扩增lytA基因，反应条件为63℃45min，采用肉眼观察浊度和琼脂糖电泳的方法来观察结果。结果在196份阳性血培养瓶中，采用LAMP法检测到肺炎链球菌16株，与传统方法比较，其检测肺炎链球菌的灵敏度和特异度均达到100％，且检测时间缩短为1h左右。模拟标本的检测结果显示该方法的最低检测限为10^2CFU／ml。结论该方法灵敏度高，特异性强，操作方便快速，适合从临床标本中检测肺炎链球菌。

摘要：目的:利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平,并进行疾病的活动性相关分析。方法:用 Primer Express v2.0软件,根据GenBank提供的序列,在人IL-2Rα mRNA的第2和第3外显子之间设计一对引物和一条TaqMan探针。提取总RNA,加入已优化的一步法FQ-RT-PCR反应体系,扩增产物经凝胶电泳后切胶回收,并与pUCm-T载体连接。制备好的重组质粒转化感受态细胞进行克隆。经测序分析确定为特异性片段后,用T7RNA聚合酶转录为cRNA,作为FQ-RT-PCR系列浓度标准品。评价FQ-RT-PCR检测 IL-2Rα mRNA的特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定HLA-B27阳性活动组与阴性非活动组强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2Rα mRNA基因的表达水平,结合血浆可溶性白细胞介素-2受体 (sIL-2R)浓度,探讨与炎症活动的相互关系。结果:成功构建了cRNA标准品。该方法的线性范围为7～107 cells/ml,其批内CV8.4%,批间CV9.6%;扩增产物克隆的双向测序结果经BLAST比较、分析,证实为IL- 2Rα mRNA特异性片段。对各30例HLA-B27阳性与阴性的强直性脊柱炎的测定表明:与正常人对照组结果比较,HLA-B27阳性组与HLA-B27阴性组IL-2Rα mRNA和sIL-2R都有明显增加(P<0.01)。IL-2Rα mRNA对炎症活动评价的灵敏度为96.7%。结论:FQ-RT-PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点;IL- 2Rα mRNA与sIL-2R比较更能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态,可能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息。

摘要：目的建立并评价检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的荧光原位杂交-流式细胞术法。方法根据正交实验设计原则,分别对荧光原位杂交法的菌液浓度、探针浓度、杂交温度等实验条件进行优化,用流式细胞仪检测杂交后的荧光信号;检测结果与荧光实时PCR的结果进行比较。结果荧光原位杂交-流式细胞术法以每微升杂交缓冲液含细菌数40×105、探针4 ng以及杂交温度50℃时检测效果最佳;其检测敏感性为97.3%、特异性为100.0%,检测结果与荧光实时PCR法差异无统计学意义。结论荧光原位杂交-流式细胞术法检测MRSA的mecA基因,具有快速、准确的特点,可在临床实验室推广应用。