摘要：实验教学是教学过程中的重要环节,笔者选择了基础微生物学中的部分实验,让学生自行设计实验并付诸实施,实践表明该法对培养和提高学生的自主性以及创新能力,具有不可忽视的作用。

摘要：目的:建立在痰标本中应用环介导恒温扩增(LAMP)技术对肺炎链球菌进行快速检测的方法。方法:根据基因序列数据库(GenBank)上提交的肺炎链球菌R6株的lytA基因序列(登陆号AE008540)设计特异LAMP引物,对痰液标本进行LAMP法检测。同时进行传统微生物检测和PCR检测。结果:所有传统微生物检测肺炎链球菌阳性的27例标本在LAMP法检测和PCR检测中也为阳性,在传统微生物检测肺炎链球菌阴性的27例标本中LAMP法有9例检出阳性,PCR法有4例阳性,统计分析表明3种方法的阳性率没有显著性差异。结论:尽管3种方法的阳性率没有显著性差异,但由于LAMP法能够更加快速、简便地检出肺部的肺炎链球菌感染,所以LAMP法对快速诊断肺炎链球菌感染仍有重要的意义。

摘要：背景中国儿童细菌耐药监测组(ISPED)每年对纳入的12家成员单位的儿童耐药监测数据进行汇总和分析,了解儿童感染性病原学变化和耐药现状。目的分析2022年我国儿童细菌感染和耐药现状,旨在指导儿童抗菌药物合理应用。设计横断面调查。方法菌株来源于2022年1月1日至12月31日ISPED成员单位细菌室,抗菌药物敏感试验采用自动化细菌鉴定及药敏分析仪或扩散纸片法,肺炎链球菌青霉素药物敏感性试验采用E-test法,结果判断采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)2022年标准。主要结局指标儿童人群菌群分布特征及主要分离株对抗菌药物耐药性变化,多重耐药菌(MDROs)的检出情况。结果2022年ISPED单位共分离到50399株临床菌株,革兰阳性菌和阴性菌的比例分别为38.8%和61.2%。前10位分离株分别是:大肠埃希菌(14.3%)、流感嗜血杆菌(11.8%)、金黄色葡萄球菌(11.4%)、肺炎链球菌(11.3%)、卡他莫拉菌(7.3%)、凝固酶阴性葡萄球菌(6.8%)、肺炎克雷伯菌(5.3%)、铜绿假单胞菌(4.4%)、鲍曼不动杆菌(2.3%)及粪肠球菌(2.1%)。大肠埃希菌是新生儿、学龄期和青春期儿童主要分离菌,流感嗜血杆菌是婴儿主要分离菌,肺炎链球菌是幼儿和学龄前期儿童主要分离菌。青霉素不敏感菌株(PNSP)在脑脊液和非脑脊液来源肺炎链球菌中的比例分别为88.9%和6.6%。甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)、碳青霉烯类耐药的肠杆菌目细菌(CRE)、铜绿假单胞菌(CR-PA)和鲍曼不动杆菌(CR-AB)检出率分别为32.8%、4.5%、7.6%和24.3%。MRSA、CRE和CR-PA在新生儿组检出率分别为33.2%、6.4%和11.3%,高于非新生儿组的32.6%、4.2%和7.5%;CR-AB在新生儿组的检出率为10.9%,低于非新生儿组的26.3%。结论2022年MDROs检出率较往年呈现下降趋势,应高度警惕和防范MRSA、CRE和CR-PA在新生儿中的定植、感染与传播。

摘要：目的:建立一种呼吸道合胞病毒(RSV)及其亚型核酸检测方法并初步应用于临床,检测浙南地区RSV及其亚型的流行情况。方法:根据RSVG蛋白基因核苷酸序列设计引物和探针,通过逆转录-聚合酶链反应-酶联夹心杂交法(RT-PCR-ELSH)随机检测了浙南地区连续两年冬春季期间202例急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽部分泌物中RSV及其亚型的病毒核酸;与病毒分离培养、直接免疫荧光法(DFA)、OligoDetect试剂盒比较探讨其临床实用性。结果:202例标本中RSV阳性123例,阳性检出率为60.9%,2002～2003年和2003～2004年冬春季分别为68.2%和52.6%;两个冬春季都以RSVA亚型为主,占78.9%,2002～2003年冬春季A亚型占RSV阳性标本中的76.7%,2003～2004年A亚型占82.0%;RT-PCR-ELSH阳性检出率与其他三种方法的阳性检出率差异无显著性(P>0.05)。结论:RT-PCR-ELSH法用于检测RSV及其亚型,是一种灵敏度高、特异性强,方便、快速的方法,非常适用于临床标本的大批量检测和流行病学调查;RSV是引起浙南地区冬春季婴幼儿急性下呼吸道感染的最主要的病原体,并以A亚型为主。

摘要：目的建立一种快速、准确、特异、定量检测副溶血弧菌及其致病因子的方法。方法选择副溶血弧菌TLH、TDH和TRH基因作为靶序列,设计并合成引物和探针;收集疑似食物中毒导致腹泻患者粪便标本487份,并对其进行检测分析。结果采用荧光聚合酶链反应检测TLH和TDH基因的灵敏度为1.0×102拷贝,而检测TRH的灵敏度为1.0×103拷贝;487份粪便标本中检出副溶血弧菌TLH基因112例(23.0%),检出携带TDH基因菌株101例(90.2%),未检出TRH基因。结论应用Taqman探针实时荧光PCR技术能够快速、准确检测副溶血弧菌及其致病基因,适合于大样本筛查;临床分离的副溶血弧菌以携带TDH基因为主。

摘要：目的建立SYBR Green实时RT-PCR快速检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)A、B亚型的方法。方法根据RSV G蛋白编码基因的核苷酸序列设计三条引物,其中P1为RSV通用引物,P2、P3分别为A、B亚型特异性引物。使用SYBR Green荧光染料结合熔解曲线分析进行检测,根据产物特征性熔解温度(melting temperatures Tm)鉴别RSV A、B亚型。结果本法对RSV Long株(A亚型)和CH18375株(B亚型)进行检测,其Tm值分别为84.06和89.06℃;与常见呼吸道病毒间无交叉反应;48例临床标本中检出RSV阳性29例,其中A亚型占72.4%(21/29),B亚型占27.6%(8/29)。结论SYBR Green实时RT-PCR结合熔解曲线分析检测RSV亚型具有快速、简便、特异等特点,可对临床标本直接分型。

摘要：目的:研究内毒素血症发生时多种脂多糖(LPS)相关蛋白在LPS转运及活化中的调节作用。方法:培养佛波醇酯(PMA)诱导分化的THP-1细胞。选取LPS、脂多糖结合蛋白(LBP)、可溶性CD14(sCD14)、杀菌/渗透增强蛋白(BPI)、高密度脂蛋白(HDL)5因素2水平采用L16(215)正交设计。配制实验体系,培养4 h后,留取上清液,发光法检测TNF-α分泌量。结果:混合体系中,BPI和HDL存在负向效应,LBP、LPS和sCD14存在正向调节效应。TNF-α分泌量与sCD14、BPI的单独主效应有关(P<0.05),并与LBP和sCD14、LBP和HDL、LPS和LBP的交互作用有关(P<0.05)。结论:在体内多种相关蛋白同时存在时,LPS对单核巨噬细胞的活化与sCD14、BPI的单独效应有关,并与LBP和sCD14、LBP和HDL、LPS和LBP交互作用有关。

摘要：检验医学系本科学生完成了四年的理论学习后,系统掌握了医学基础和专业知识,进入实习阶段。这一年,是学生从学校走向社会的过渡时期,是锻炼学生操作技能,训练动手能力和科研思维的重要阶段。按照我校全日制检验医学系本科教学大纲规定,学生在毕业实习期间,在带教老师的指导下,要完成一篇毕业论文,借此来实践科研与写作的全过程,适时地培养学生初步科研思维,诱发、培养科研写作兴趣。

摘要：目的:了解浙江温州地区婴幼儿腹泻患者不同型别腺病毒的感染情况。方法:根据Gene Bank中腺病毒六邻体基因序列设计一对通用引物,建立PCR方法检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA,并对阳性标本进行PCR产物测序分析。结果:建立了快速、特异地检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA的PCR技术;127份婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA阳性4份,阳性率为3.15%(4/127);经PCR产物直接测序分析,3份为Ad3型,阳性率为2.36%(3/127),1份为Ad7型,阳性率为0.79%(1/127)。结论:PCR技术结合PCR产物直接测序的方法,使分析具有敏感、特异等优点,适用于腹泻标本中腺病毒的检测及分型;引起浙江温州地区婴幼儿腹泻的腺病毒主要为Ad3型和Ad7型。

摘要：目的 :建立一种灵敏、特异、精确的定量检测人成纤维细胞生长因子mRNA(FGFmRNA)的逆转录 聚合酶链反应 酶联免疫吸附分析技术。方法 :设计两条特异探针 ,其序列分别与FGFmRNART PCR产物的一条链的不同区域互补。其中一条为带有氨基修饰的捕获探针 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,另一条为标记生物素的检测探针。提取人外周血单个核细胞总RNA ,进行RT PCR扩增 ,产物热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交 ,最后加入链亲和素 辣根过氧化物酶 (SAV HRP)及底物 ,在 4 5 0nm波长处检测吸光度。结果 :该方法检测FGFmRNA灵敏度高、特异性好 ,与非目的扩增收稿日期 :2 0 0 2 -10 -3 0 ;修回日期 :2 0 0 2 -11-2 0基金项目 :浙江省自然科学基金资助项目 (No.3 975 10 )。作者简介 :陈少波 ( 1965 -) ,男 ,浙江温州人 ,高级工程师。通信作者 :吕建新 (E -mail:jx@***)。产物杂交无阳性信号 ;重复性良好。结论 :本方法具有操作简单、灵敏度高、特异性好的优点 ,适合于FGFmRNA的定量检测。