摘要：目的:探讨乙肝表面抗原-CD40L胞外段融合蛋白设计的合理性。方法:应用Gene Constructionkit2.5、DNAStar软件和***网站提供的分析方案分析重组体的开放读框以及融合蛋白的柔性、亲水性、抗原性、表位等性质,并作了二级结构模拟分析。结果:重组体CMV启动子下游有完整的目的基因ORF,融合蛋白二级结构水平未出现新的抗原性及表位,亲水性无改变,Linker部位抗原性低,呈中性且柔性高,不影响两端的蛋白质二级结构及融合蛋白空间构象。结论:重组体设计合理,融合蛋白很大可能保留了乙肝表面抗原和CD40L胞外段的生物学活性,为进一步研究提供了理论依据。

摘要：目的构建HBVS—ecdCD40L融合基因，并利用软件对其相应融合蛋白的二级结构进行预测。方法利用分子生物学技术将HBVS基因与人CD40L胞外段基因进行融合，构建融合基因及其真核表达载体，并利用蛋白质分析软件对相应融合蛋白二级结构水平的一些生物学特性进行预测。结果融合基因序列与设计一致，其相应氨基酸序列经软件分析，并与HBsAg和CD40L胞外段氨基酸序列分析结果比较，发现在二级结构上几乎无变化，亲水性和抗原性等生物学活性几乎未受影响。结论HBVS-ecdCD40L融合基因构建成功，软件分析表明融合过程未影响HBsAg和人CD40L胞外段的生物学活性，为进一步研究奠定基础。

摘要：目的:构建HBe(385-420)-ecdCD40L融合基因真核表达载体,探讨其所翻译的融合蛋白设计的合理性。方法:采用分子生物学技术将HBe(385-420)基因与CD40L胞外段(ecd)基因进行融合,构建融合基因的真核表达载体;应用生物信息学初步分析融合蛋白的物理化学性质、柔性、抗原性、亲水性、表位以及二级结构等。结果:成功构建真核表达载体。通过分析,HBe(385-420)、ecdCD40L两个基因连接之后亲水性和疏水性未受影响,融合蛋白未出现新的抗原性及表位,连接链(Linker)不影响蛋白质的二级结构及融合蛋白的空间构象。结论:从生物软件分析结果可知重组体设计较合理,融合蛋白保留了HBe(385-420)和CD40L胞外段的生物学活性,为进一步研究该基因奠定了基础。

摘要：目的观察大鼠急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)胰腺组织损伤时腺泡细胞线粒体膜电位(mitochon-drial membrane potential,△Ψm)及caspase3表达的变化,探讨褪黑素(melatonin,MT)对大鼠急性重症胰腺炎胰腺损伤的保护作用。方法取雄性SD大鼠48只,采用随机区组设计,随机分为假手术组(SO)、急性重症胰腺炎组(SAP)、褪黑素干预组(MT),采取经胰管注射4%牛黄胆酸钠法制造大鼠重症胰腺炎模型,造模成功后4h、10h处死大鼠,各组各时点8只。检测血清淀粉酶,苏木精-伊红染色观察胰腺病理变化,流式细胞术检测不同时间段腺泡细胞线粒体膜电位,Realtime-PCR检测caspase3的表达。结果与假手术组对照,急性重症胰腺炎诱导后4h、10h线粒体膜电位明显降低(1.579±0.103 vs 8.037±1.001,0.059±0.021 vs 8.508±0.494,P<0.01),caspase3相对表达量增多(1.470±0.173,1.700±0.180,P<0.01);与急性重症胰腺炎组相比,褪黑素治疗组4h、10h线粒体膜电位明显降低(0.580±0.107 vs 1.579±0.103,0.019±0.010 vs 0.059±0.021,P<0.01),caspase3相对表达量增多(2.069±0.282,2.520±0.296,P<0.01)。结论褪黑素可促进急性重症胰腺炎线粒体膜电位的降低及caspase3的表达增多,诱导细胞凋亡,对急性重症胰腺炎有保护作用。

摘要：目的研究慢性乙型肝炎免疫清除期患者乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因多态性。方法设计特异性引物,自10例慢性乙型肝炎免疫清除期患者血清中扩增S基因片段,TA克隆法克隆到T载体中,随机选择克隆测序。结果共20个克隆被测序,20个克隆S蛋白发现12个不同位点的32次变异。主要集中在T细胞表位,B细胞表位及a决定簇。结论慢性乙型肝炎免疫清除期患者存在HBsAg变异,可能仍然存在HBsAg免疫耐受。

摘要：目的　从耐药肿瘤组织中进行mdr1cDNA的全长克隆和pc MDR1重组质粒的构建。并转染HepG2细胞 ,快速诱导其耐药 ,并筛选其抗性克隆。 方法　设计单酶切位点引物 ,利用长距离逆转录 聚合酶链反应 (LongRT PCR )技术 ,从HepG2耐药细胞扩增mdr1cDNA ,约 3 .8kb大小。将其插入至真核表达载体 pcDNA3 .0质粒中构建 pc MDR1诱导质粒 ,使其能够在真核细胞中表达P 糖蛋白 (P gp)。转染HepG2细胞 ,并用G418筛选出转染的细胞。结果　成功地扩增出3 .8kb左右的mdr1cDNA片段 ,经酶切鉴定、RT PCR扩增特异片段和序列测序结果显示质粒构建初步成功 ,用G418筛选细胞耐药抗性克隆的时间约为 14d。结论　从耐药肿瘤组织中进行mdr1cDNA全克隆和pc MDR1诱导质粒构建的成功为快速诱导细胞耐药和进一步研究肿瘤细胞的耐药机制奠定了基础。