摘要：本研究采用均匀设计和单因素试验相结合的方法,探寻淫羊藿ISSR-PCR的各组分(即引物, 2×Taq Master Mix,模板DNA)的最佳用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响,为进一步使用ISSR分子标记分析淫羊藿的遗传多样性提供科学依据。结果表明,筛选的最佳体系为:在20μL的体系中,模板DNA的量为30ng,2×Taq Master Mix的量为9.8μL,引物为0.325μmol/L。此外,筛选出7条多态性较好、条带稳定的引物(UBC-808, UBC814, UBC826, UBC827, UBC840, UBC846及UBC856),并对其进行温度梯度PCR,结果表明,所选引物的最佳退火温度介于46.8℃~65℃之间。在此基础上,对13份淫羊藿种质资源进行ISSR扩增验证,结果表明建立的最佳反应体系扩增效果较好,稳定性强,对淫羊藿的遗传多样性分析、鉴定等具有较好的应用价值。

摘要：利用两轮混合均匀设计的方法,研究引物、2×Taq master mix、模板DNA以及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响,在此基础上获得优化的川续断ISSR反应体系,为后续开展川续断的遗传多样性分析奠定基础。试验显示川续断ISSR-PCR最佳反应体系为:在18μL的反应体系中含有2×Taq Master Mix 10.44μL,模板DNA 45 ng,引物0.35μmol/L。在此基础上,从100条引物中筛选出5条扩增较稳定、多态性丰富的引物,随后进行的温度梯度PCR实验发现引物最佳退火温度介于45℃~58℃之间。该试验表明采用混合均匀设计和单因素试验相结合的方法,可以减少实验处理次数,快速建立ISSR反应体系,经过对9份川续断种质资源进行ISSR扩增检测,证明该体系稳定可靠,可用于川续断遗传多样性分析。

摘要：为了得到适宜的咸丰白术ISSR反应体系,采用两轮U12(62×4)均匀设计的方法,对ISSR反应中各组分设置不同的梯度,分析反应体系各组分用量对扩增结果的影响。结果表明,在18μL的ISSR反应体系中,引物0.29μmol/L,2×Taq Master Mix 9.6μL,模板DNA 47 ng时,扩增条带较清晰,多态性好。根据得到的优化体系,进一步开展白术的引物筛选,并从中得到了9条扩增条带相对清晰稳定、多态性较好的引物。对筛选的多态性引物开展了温度梯度PCR实验,发现温度对ISSR-PCR扩增结果影响显著。本实验通过采用均匀设计的方法,降低了常规体系优化实验所需次数,节省了时间和试剂的用量,为快速建立ISSR反应体系和后续咸丰白术遗传多样性分析提供了便利与帮助。

摘要：【目的】优化湖北贝母ISSR-PCR体系,并筛选适用于湖北贝母的多态性引物,为后续湖北贝母的分子辅助育种及遗传多样性和亲缘关系分析等提供科学依据。【方法】采用U12(43)均匀设计和单因素试验结合的方法,获得PCR体系各组分(2×Taq Master Mix,模板DNA,引物)的最佳用量,在此基础上通过梯度退火温度实验探究引物的最佳退火温度。【结果】湖北贝母ISSR-PCR最佳反应体系为:20μL反应体系中,2×Taq Master Mix 10.5μL,模板DNA 0.8μL(40.0 ng),引物2.2μL(5.5μmol),ddH2O 6.5μL,ISSR-PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性0.75 min,54.3℃~60.0℃退火0.75 min,72℃延伸1.5 min,40个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。利用优化的反应体系筛选了6条多态性较好、扩增稳定的引物(UBC848、UBC850、UBC853、UBC857、UBC859、UBC866),其最佳退火温度分别为59.3、58.2、56.9、54.3、59.3和60.0℃。用优化的ISSR-PCR体系对12份不同产地的湖北贝母资源进行PCR扩增,结果表明,该反应体系稳定可靠,不同产地湖北贝母具有较丰富的遗传多样性。【结论】优化的湖北贝母ISSR-PCR反应体系可用于湖北贝母种质资源鉴定、亲缘关系和遗传多样性分析等研究。

摘要：本研究在均匀设计的基础上,采用单因素试验进行优化,探寻重齿毛当归进行ISSR-PCR扩增时各组分(即引物,2×Taq Master Mix,模板DNA)的最佳用量,建立重齿毛当归ISSR-PCR扩增体系。筛选的最佳体系为:在20μL的体系中,2×Taq Master Mix:11.4μL、DNA:9.04 ng、引物:0.325μmol/L。同时,还筛选出3条多态性较好、条带稳定的引物(UBC807,UBC810,UBC812)。在此基础上,进行ISSR-PCR扩增验证,结果表明该反应体系扩增效果好,稳定性强,为重齿毛当归的种质资源评价、物种真伪鉴定等提供了一种新的分子标记方法。

摘要：目的:通过实地调查和分析筛选出湖北贝母较优的种植模式。方法:对厚朴林下种植湖北贝母及单作湖北贝母两种种植模式下湖北贝母的生长状况进行调查,并对其性状构成进行分析和评价。结果:除叶长、叶宽外,其余性状均表现为林下模式大于单作模式;地上部分性状叶片数、叶长与株高显著正相关,地下部分性状与地上重均显著正相关;新生根数、须根数、鳞茎重、须根重及地上重在第1主成分特征向量中载荷因子较高;须根数、新生根数、鳞茎重、须根重、须根长、地上重与第1排序轴显著正相关。结论:林下贝母生长状况优于单作贝母,即林下种植模式更适宜湖北贝母的生长,在实际生产中应优先考虑。地下部分性状新生根数、须根数、鳞茎重、须根重是反映湖北贝母生长状况的主要指标,后续试验设计时应优先考虑。