摘要：目的:检测转铁蛋白能否增强新型靶向性非病毒载体K16GRGDSPC寡肽介导外源基因对骨髓基质干细胞的转染和表达,优化寡肽载体的转染条件,为下一步利用寡肽载体构建载基因基质材料进行骨缺损修复提供实验依据。方法:实验于2004-10/2005-01在协和医院骨科实验室完成。①用固相合成法合成K16GRGDSPC寡肽并用质谱仪和高压液相色谱仪进行检测。②新西兰大白兔麻醉后无菌条件下自股骨大转子处抽取骨髓2mL,1500g离心收集细胞,加入含体积分数0.2新生牛血清的DMEM混悬细胞于培养瓶中常规培养。48h后更换培养基,除去未贴壁细胞,细胞生长至85%融合后传代。③应用转化生长因子真核表达载体pcDNA3-TGFβ1和增强型绿色荧光蛋白真核表达载体pcDNA3-EGFP,观察转铁蛋白对K16GRGDSPC寡肽介导上述两种质粒转染骨髓基质干细胞的转染及表达效率的影响。结果:①寡肽的分子量和纯度检测:质谱图显示肽平均分子质量为2741.3307m/z,与理论上计算设计合成肽的平均分子质量一致,高压液相色谱仪示合成肽的纯度为94%～95%。②转铁蛋白、寡肽载体、质粒DNA三者形成复合物的电泳鉴定结果:将1μg寡肽载体分别与10μg或20μg转铁蛋白及2μgpcDNA3-TGFβ1混合后电泳,结果显示三者混合物的电泳迁移率均低于不加转铁蛋白的空白对照,且加20μg转铁蛋白较加10μg转铁蛋白的电泳迁移率更低。说明带正电荷的转铁蛋白与寡肽载体和质粒DNA形成了复合物。③转铁蛋白增加K16GRGDSPC寡肽转染效率:2μgpEGFP质粒与6μgK16-GRGDSPC寡肽加5～45μg转铁蛋白转染骨髓基质干细胞,转染效率随转铁蛋白浓度的增加而逐步提高,在25μg时转染效率达到最大,进一步增高转铁蛋白浓度,转染效率并不增加。④转化生长因子β1活性检测结果:体外以6μgK16GRGDSPC寡肽加25μg转铁蛋白介导2μgpcDNA3-TGFβ1转染骨髓基质干细胞,转染72h后测得明显高于未加转铁蛋白的转化生长因子β1的表达量[(64.4±4.3),(48.6±3.5)μg/L,P<0.01]。结论:转铁蛋白能与载体K16GRGDSPC和质粒DNA形成复合物,且显著增强K16GRGDSPC寡肽介导外源基因在骨髓基质干细胞中的转染和表达。

摘要：背景:有研究证实,大蒜素对LM-8细胞增殖及凋亡有影响。目的:观察大蒜素干预C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达,以及LM-8细胞的形态学变化与Bcl-2及Bax变化的关系。设计:随机分组,非盲法,细胞水平体外实验。单位:实验于2006-09/2007-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成。材料:实验所用C3H小鼠LM-8骨肉瘤细胞株购自解放军第四军医大学实验动物中心。大蒜素为武汉汇海公司产品,是从大蒜球茎中分离出的硫化物。CellCountingKit-8试剂购于上海同仁化学研究所,Bcl-2和Bax抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司。方法:以含体积分数为0.1新生牛血清的1640完全培养基,培养LM-8细胞,制作细胞爬片。SP免疫细胞组织化学技术检测细胞爬片中Bcl-2和Bax蛋白表达;倒置显微镜下观察5.0,10.0和15.0mg/L质量浓度大蒜素作用前后LM-8细胞形态变化;将LM-8细胞调整至7.5×107L-1接种于96孔板,用1.0,5.0,10.0和15.0mg/L质量浓度的大蒜素处理细胞,设立不加任何处理因素的对照组及不含细胞和药物的培养基空白组,孵育24,48,72h后取出培养板,加入CCK-8测定吸光度值,计算LM-8细胞生长抑制率;以5.0,10.0和15.0mg/L质量浓度大蒜素干预LM-8细胞24,48,72h,消化离心收集细胞,以流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化。主要观察指标:LM-8细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达;LM-8细胞形态及增殖、凋亡情况。结果:①Bcl-2和Bax蛋白表达:大蒜素可以降低Bcl-2表达,增强Bax表达,经15.0mg/L大蒜素作用72h,Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率及Bcl-2/Bax表达与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。②LM-8细胞的形态:经不同质量浓度大蒜素干预后均出现明显凋亡表现。③LM-8细胞的增殖:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的增殖,当大蒜素浓度从1.0mg/L增加到15.0mg/L,LM-8细胞72h时生长抑制率由(23.87±3.26)%增至(58.32±5.38)%,在72h其药物半数抑制率浓度是11.09mg/L。④LM-8细胞的凋亡:5.0,10.0和15.0mg/L质量浓度的大蒜素作用72h后可诱导LM-8细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:①大蒜素可抑制LM-8细胞增殖,该效应与大蒜素的浓度和时间有关。②大蒜素可诱导LM-8细胞凋亡,作用呈浓度依赖性。③大蒜素抑制LM-8细胞增殖和诱导LM-8细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关。

摘要：目的:观察异形羟基磷灰石义眼台植入术并发症及手术效果,探讨异形义眼台的适应证及其临床应用价值。方法:设计不同体积的异形羟基磷灰石义眼台,治疗眼球萎缩、眼内容物摘除及眼球摘除术后患者共30例。对照组植入常规圆球形羟基磷灰石义眼台共30例。异形义眼台组与对照组间性别、年龄、眼部情况相似。手术后随访时间6mo以上,观察患者义眼台植入术后球结膜愈合时间、义眼台暴露、感染等并发症、义眼台活动度、位置以及与义眼片适合程度的差异。结果:异形羟基磷灰石义眼台组没有发生义眼台暴露、感染等严重并发症,球结膜愈合时间短,义眼台植入后前表面呈圆弧形,能与义眼片很好的吻合,义眼台活动度及位置均好于对照组。对照组有2例(7%)发生早期球结膜裂开的并发症,经过治疗后均愈合。结论:异形义眼台可以降低义眼台植入后引起的并发症,可以有效适应患者眼部病变的情况,获得良好的手术效果,适应证更广,安全性更好。

摘要：抗体偶联药物(antibody-drug conjugates, ADC)由单克隆抗体、连接子和细胞毒药物3部分共价偶联组成,是一类新型的肿瘤治疗药物。ADC药物创新的分子设计和作用机制兼具传统化疗药物对肿瘤细胞的强大杀伤作用以及抗体药物的精准靶向性,近年来越来越受到关注。同时在ADC药物肿瘤治疗中,对可能出现的血液系统、心脏、肺、肝、眼毒性等药物不良反应进行必要的管理不容忽视。截至2022年8月,在我国已有5种ADC药物获批上市,随着ADC药物的广泛应用,建立多学科联合的用药安全性管理体系,有助于把握ADC药物相关不良反应最佳的治疗时机并及时制定最优处置方案。为此中国药学会医院药学专业委员会和中国抗癌协会肿瘤临床化疗专业委员会,根据我国ADC药物不良反应管理现状,结合国际最新理论和循证医学证据,组织相关专家讨论并联合制定了ADC药物不良反应跨学科管理中国专家共识。

摘要：背景:以往的研究表明,ADp14ARF转染p53阳性的肿瘤细胞系,可以发现明显的细胞增殖受阻现象。而转染p53阴性的肿瘤细胞系,尽管也可见肿瘤细胞增殖受阻,但在程度上明显轻于前者。同时转染p14ARF和p53两种基因,既增强p53表达又加强p53积累,能否更易促进肿瘤细胞凋亡?目的:利用基因工程技术构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53,并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用。设计:随机对照观察。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。材料:实验于2005-01/2006-10于华中科技大学同济医学院基础医学院免疫教研室公共实验平台完成。人骨肉瘤MG-63细胞有华中科技大学同济医学院免疫教研室细胞室提供。含p53全长基因序列的质粒pIRES-p53和pIRES载体均购自武汉晶赛生物公司。方法:利用基因工程技术,将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA(0.5kb)亚克隆至pIRES载体中,通过PCR、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53。通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中,并筛选出阳性克隆,将细胞分为3组:空白对照组(MG-63细胞),空载体对照组(稳定转染pIRES-neo细胞),p14ARF-p53组(稳定转染pIRES-p14ARF-p53细胞)。①采用流式细胞仪测定转染前后瘤细胞DNA含量和细胞周期。②逆转录PCR(RT-PCR)和Westernbolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测。③采用噻唑蓝比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况。主要观察指标:①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期。②瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达。③细胞增殖情况。结果:成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53。①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期:流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期。②蛋白表达检测结果:RT-PCR与Westernblot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达。③细胞生长情况:转染MG-63后24,48,72,96h瘤细胞生长抑制率分别为33.43%、69.37%、66.19%、75.26%,与空载体对照组差异显著(P<0.01)。结论:野生型p53和p14ARF可协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡。

摘要：背景:骨髓间质干细胞体内、外均能分化为心肌细胞,但数量少且定向分化率较低。目的:探讨干细胞因子促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的作用。设计:开放性实验。单位:咸宁学院心血管疾病研究所,华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科。材料:实验于2003-10/2004-08在咸宁学院心血管疾病研究所实验中心完成。选取出生1～2d的SD新生大鼠20只,用于心肌细胞的培养。另选取清洁级成年SD大鼠25只,随机数字表法分为干细胞因子组、空白对照组,12只/组,剩余1只大鼠用于骨髓间充质干细胞的提取、培养及纯化。方法:①在共培养前用4,6-联脒-2-苯基吲哚标记骨髓间充质干细胞。干细胞因子组对大鼠进行体内动员,连续5d皮下注射重组鼠干细胞因子,20μg/(kg·d),然后提取其骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养。空白对照组皮下注射相等剂量的生理盐水,未施加任何干预的骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养。②用数码显微摄像及免疫荧光技术分别记录和检测MHCα/β、肌钙蛋白T的表达,测定4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的百分率。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞生长情况。②检测4,6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的核标记率。③拟做共培养的心肌细胞活力、纯度分析。④共培养后骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化情况。结果:①骨髓细胞悬液接种于塑料培养皿,细胞呈圆形散在分布于瓶底,24h换液后可见稀少的长梭形贴壁细胞,4d后梭形贴壁细胞开始增多,进入对数增长期,8～12d达到80%的融合。传代细胞增殖更加迅速,随着换液与传代,骨髓间充质干细胞逐渐得到纯化。②4,6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的胞核标记率为100%。③心肌细胞体外培养第3天,搏动细胞的百分比为63%,搏动频率40～60次/min。免疫细胞化学技术检测肌钙蛋白T表达的阳性细胞百分比为75%。④在共培养的第2,3天,干细胞因子组4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达MHCα/β的阳性百分率均显著高于空白对照组(P<0.01);在共培养的第3,4,5天,干细胞因子组4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达肌钙蛋白T的阳性百分率亦均显著高于空白对照组(P<0.01)。结论:干细胞因子对骨髓间充质干细胞具有明显的促增殖分化作用。

摘要：背景心肌细胞凋亡与缺血再灌注损伤直接相关,Bcl-2表达与细胞凋亡密切相关。临床和实验证实人参和氯沙坦均能改善心肌缺血,对缺血再灌注损伤有明显保护作用,但两者对缺血再灌注心肌细胞损伤有何异同?目的探讨人参和氯沙坦对大鼠缺血再灌注心肌细胞内Bcl-2m RNA和蛋白质表达的影响。设计随机对照实验。单位华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科,华中科技大学同济医学院神经生物学系。材料实验于2002-11/2003-04在华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科实验室完成。采用健康成年W istar大鼠40只,体质量200～250g,雌雄不限,随机分为假手术对照组,缺血再灌注组,人参治疗组和氯沙坦治疗组,每组10只。方法缺血再灌注组,人参治疗组和氯沙坦治疗组均造模,假手术对照组不造模。氯沙坦治疗组术前2h,术后立即和术后24h分别给予氯沙坦20m g/kg(1m L),灌胃各1次;人参治疗组术前2h,术后立即和术后24h分别给予红参煎剂(1g/m L,1m L/次)灌胃各1次。假手术对照组和缺血再灌注组分别于相同时间给予相同容积的生理盐水灌胃。用原位杂交和免疫组化分别检测人参和氯沙坦治疗后的大鼠缺血再灌注心肌细胞内Bcl-2m RNA和蛋白质含量,并与对照组比较。主要观察指标人参和氯沙坦治疗后的大鼠缺血再灌注心肌细胞内Bcl-2m RNA和蛋白质的表达水平,并与对照组比较。结果实验大鼠40只均进入结果分析。①氯沙坦组与对照组心肌细胞内Bcl-2mRNA,蛋白含量无明显差别(P>0.05)。②人参治疗组Bcl-2m RNA含量和Bcl-2蛋白表达高于缺血再灌注组(P<0.05或0.01)。结论人参治疗组Bcl-2m RNA及Bcl-2蛋白表达均较氯沙坦治疗组高,提示人参防治心肌缺血再灌注损伤抑制心肌细胞凋亡与氯沙坦不同。

摘要：背景:血浆纤维蛋白原(fibrinogen,Fbg)水平的升高是脑血管病的主要危险因素,纤维蛋白单体聚合功能的评价远较Fbg水平的测定具有更重要的临床价值。目的:研究缺血性脑血管病患者纤维蛋白单体聚合功能的临床意义及康复介入对其的影响作用。设计:以患者和正常人为研究对象,病例-对照研究。单位:一所大学医院血液病研究所和神经内科。对象:2001-09/2002-03检测华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科110例不同类型的缺血性脑血管病患者和50例健康人。方法:随机选取31例脑梗死患者进行康复介入,采用血浆纤维蛋白单位聚合功能测定系统进行测定各组血浆纤维蛋白单体聚合功能参数。主要观察指标:纤维蛋白单体聚合功能各项参数的异常情况。结果:缺血性脑血管病患者较健康人纤维蛋白单体聚合功能各项参数均显著增高(P<0.01);缺血性脑血管病患者Fbg水平和纤维蛋白单体聚合速率(FMPV)的异常率较健康人显著增高(P<0.01),纤维蛋白单体聚合功能异常患者缺血性脑血管病的相对危险度(RR)分别是健康对照组的4～31倍;脑梗死患者中,前循环梗死组FMPV较后循环梗死组和腔隙性脑梗死组显著升高(P<0.05);康复介入前脑梗死患者纤维蛋白单体聚合功能显著高于健康对照组,康复介入后纤维蛋白单体聚合功能各参数有所降低,但与治?

摘要：背景:微弧氧化工艺是一种直接在金属表面原位生长陶瓷层的新型表面处理技术。而作为种植体材料的表面改性技术还处于实验阶段,有关其生物相容性的研究报道较少。目的:采用微弧氧化工艺对钛片进行表面改性,并检测这种改性后生物材料的溶血率。设计:设置阳性、阴性对照,对比观察,金标准对照。单位:武汉协和医院。材料:选用健康雄性成年新西兰大白兔1只,普通级,体质量2.5kg。纯钛棒TA1(宝鸡市英耐特有色金属有限公司);经过微弧氧化表面改性处理的钛试件;20g/L草酸钾。方法:实验于2006-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科实验市完成。①材料:按一定比例配置去离子水和磷酸氢二钠、乙酸钙成微弧氧化电解液,直径为10mm,厚度为2mm的钛片置于电解液中表面进行微弧氧化反应10min。②实验分组:实验组、阴性对照组及阳性对照组。实验组:微弧氧化-Ti试件,浸泡在10mL生理盐水的试管中;阳性对照组:每个试管加10mL去离子水;阴性对照组:每个试管加10mL生理盐水。③实验操作:抽取新西兰大白兔新鲜全血,抗凝后分别与实验组和阳性对照、阴性对照组接触,用紫外-可见光分光光度计比色,评价各组的溶血率。按国际化标准组织规定要求,以溶血率≤5%判定材料符合医用材料的溶血要求,溶血率>5%预示材料有溶血作用。主要观察指标:3组材料的溶血率。结果:实验组溶血率为0.90%,提示该种植材料无溶血作用。结论:微弧氧化钛基材料对红细胞无毒性作用,符合国内外溶血测试标准。

摘要：背景：课题组前期在建立海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹活细胞制备技术的基础上,已证明微囊化嗜铬细胞有良好的镇痛效果,而该微囊包被材料的免疫隔离作用尚需明确。目的：观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化嗜铬细胞移植到大鼠眼前房和足胝部的免疫排斥反应,评价微囊化技术的免疫隔离作用。设计：随机对照动物实验。单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室。材料：选用雌性SD大鼠48只,鼠龄3个月,由华中科技大学同济医学院实验动物部提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。实验所用海藻酸钠、多聚赖氨酸为美国Sigma公司产品,微囊发生器为德国赠送。方法：实验于2002-09/2003-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室完成。①取6名脑死亡健康成人的肾上腺髓质,经分离、消化、培养后,制备成人嗜铬细胞悬液。供者家属对实验知情同意,实验方案通过医院伦理委员会批准。采用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠法制作空微囊和微囊化细胞。②48只大鼠被随机分为3组：人嗜铬细胞移植组、空微囊移植组、微囊化人嗜铬细胞移植组,每组分眼前房和足胝部两个部位进行移植,每个部位8只。人嗜铬细胞移植组分别将2×1010L-1细胞悬液注入大鼠右眼前房和左足胝部。空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞组分别吸取空微囊（100个微囊）或ME-HCC（100个微囊,每个微囊包裹400~500个细胞）注入大鼠右眼前房和左足胝部。主要观察指标：于移植术后第7天采用ELISA法测定血清白细胞介素2水平。采用激光散射比浊仪测定血清IgG和IgM水平。移植术后第28天取大鼠右侧眼球及左侧足组织作常规切片,苏木精-伊红染色,40倍光镜下观察组织形态。结果：大鼠48只均进入结果分析。①血清白细胞介素2,IgG,IgM水平：空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞移植组均低于人嗜铬细胞移植组,差异有显著性意义（t=8.544~21.64,P〈0.01）。②大鼠眼前房和足胝部组织形态：人嗜铬细胞移植组大鼠的眼前房内和足胝部可见大量淋巴细胞和中性粒细胞浸润。空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞移植组大鼠眼前房和足胝部仅见少量淋巴细胞和中性粒细胞。结论：海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化所产生的良好生物相容性及其机械稳定性,使之有效地发挥了免疫排斥隔离作用。