摘要：常规PCR方法不适宜于实验条件不足的基层现场检测H7N9禽流感病毒,不利于疑似病例的及时诊治。本研究旨在建立一种快速简便、高灵敏度、低成本的H7N9禽流感病毒快速核酸检测技术。选用H7N9禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因作为靶标区域设计引物,采用FITC和Biotin标记上下游引物,通过逆转录解旋酶依赖性等温扩增(Reverse transcription helicase-dependent isothermal amplification,RT-HDA)技术扩增病毒RNA,辅以胶体金免疫层析试纸检测核酸扩增产物,建立H7N9禽流感病毒等温扩增检测方法。采用H7N9禽流感病毒质粒和病毒培养物对该方法的灵敏性、特异性和重复性进行评价,结果显示:病毒最低检测限20个拷贝数/μL,与常规PCR方法相比较无明显差异,重复性试验一致,与其他型别的禽流感、流感病毒无交叉反应。本研究建立的RT-HDA联合胶体金免疫层析试纸检测H7N9禽病毒检测方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,特别适用于现场条件下检测H7N9禽流感病毒快速简便的检测。

摘要：目的了解北京市昌平区小学生尿中甲基叔丁基醚(methyl tert-butyl ether,MTBE)的暴露水平及其影响因素,为评价MTBE作为小学生汽车尾气内暴露生物标志物的可行性提供线索。方法采用定群研究的设计方法,于2018年6月7—13日连续7 d(每天3次,分别为8:00、11:00和16:00,包括工作日和休息日)对从昌平区智星学校随机抽取的20名六年级学生(男、女各10名)进行尿样采集,共收集尿样420份,测定其中MTBE水平。通过问卷获取小学生基本信息与日常活动情况。结果420份尿样均检出MTBE。经过校正,小学生8:00、11:00和16:00的即时尿中MTBE暴露水平的几何均数分别为0.12,0.12,0.12 mg/g肌酐。暴露水平分别按室外活动时间、家是否靠近主干道、所在班级每天使用空气净化设备时间分组时,组间差异有统计学意义(P值分别为0.00,0.04,0.00)。结论北京市某小学学生存在MTBE普遍暴露,尿中MTBE暴露水平的影响因素有家是否靠近交通主干道、每日室外活动时间、班级每日使用空气净化设备时间。有必要对尿MTBE作为汽车尾气暴露内标志物开展更深入研究。

摘要：目的本研究拟在湖北省疾病预防控制中心对珠海海泰生物制药有限公司研制的麻疹、风疹病毒核酸荧光定量聚合酶链式反应(polymerase china reaction PCR)检测试剂盒开展临床试验,以对该试剂盒的各项性能进行评估。方法本试验设计采用单盲方法对我省范围内的134份咽拭子、尿液、漱口水、分离培养物样品进行检测,本研究中用海泰试剂和逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法对考核样品进行平行检测。采用国家下发的麻疹,风疹病毒分型引物分别进行RT-PCR,对RT-PCR产物进行凝胶电泳和基因测序分析。对与凝胶电泳结果不一致的样本,同时用海泰试剂和RT-PCR法重复试验并做凝胶电泳和基因测序分析。对于基因测序成功的样本,以基因测序法为准;基因测序失败的样本以凝胶电泳结果为准。最终结果以重复试验为准,通过对检测结果进行统计、分析,对海泰试剂的灵敏度、特异性、精密性及准确性等做出评价。结果在本试验中海泰试剂与参考方法相比较,其灵敏度为100%,特异度为92.9%,假阳性率为7.1%,假阴性率为0,粗一致性为99.3%,调整一致性为98%,约登指数为0.929,阳性预示值为99.2%,阴性预示值为100%。采用交叉四格表Kappa检验的统计方式进行分析,海泰试剂和参比试剂检测结果的一致率为99.3%,Kappa>0.75。结论评估试剂同参照试剂相比结果符合较好。该试剂盒为疾病的临床诊断、流行病调查提供了一种更为简捷精确,切实可行的检测手段。

摘要：目的建立一种快速、灵敏、可视化的H7亚型禽流感病毒等温核酸扩增检测方法。方法针对H7N9禽流感病毒的HA片段保守区序列设计引物、探针,优化反应温度,建立H7亚型禽流感病毒的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条检测技术,评价其特异性和敏感性,并与Real time PCR方法进行比较。结果该方法检测H7亚型禽流感病毒的最低检出限为20拷贝/μL,与其他流感/禽流感病毒无交叉反应,反应可在20~50℃温度范围内进行,临床样本检测结果与Real time PCR法一致性为100.0%。结论该检测方法具有快速、特异及灵敏的特点,为在基层和现场快速检测H7亚型禽流感病毒提供了新的方法。

摘要：目的鉴定发热伴血小板减少综合征病毒的CD8^(+)T细胞表位,为了解抗病毒免疫机制和疫苗设计提供参考。方法基于生物信息学方法在SFTSV非结构蛋白中预测潜在表位,利用酶联免疫斑点吸附试验、胞内因子染色、四聚体染色验证表位的免疫原性,体外复性试验验证表位与人白细胞分化抗原的结合力。结果NS-3多肽能刺激特异性CD8^(+)T分泌多种细胞因子,且诱导CD107a表达水平升高。康复病例中检测到NS-3表位特异性CD8^(+)T细胞分群。NS-3与HLA-A*3001能稳定结合。结论从SFTSV的NS蛋白中鉴定到首个人源HLA-A*3001限制性CD8^(+)T细胞表位NS-3,为疫苗开发提供依据。