摘要：目的:建立人白细胞介素17(IL-17)受体(IL-17RA)表达缺陷型细胞模型。方法:设计并合成针对人IL-17RA cDNA的寡聚DNA引物,退火并连接至载体pSilencer2.1-U6,将重组质粒转染至293T细胞,G418筛选转染阳性细胞,提取转染阳性细胞mRNA,逆转录成cDNA,经荧光定量PCR检测细胞IL-17RA基因表达水平,最后用流式细胞仪检测转染阳性细胞表面IL-17受体的表达。结果:①限制性酶切和测序结果表明成功构建了人IL-17RA的特异性shRNA真核表达载体shRNA-IL-17RA。②荧光定量PCR和流式细胞仪结果显示成功构建了IL-17RA表达缺陷型细胞模型。结论:IL-17RA表达缺陷型的细胞模型的建立为深入研究IL-17在骨关节炎中的功能以及针对细胞因子受体设计新的治疗骨关节炎的药物奠定基础。

摘要：目的:建立检测ROS1融合基因的荧光PCR法,为肺癌病人的个体化药物治疗提供新的检测试剂盒。方法:根据人类ROS1基因的外显子和融合伙伴基因的外显子序列设计引物和探针,建立ROS1融合基因的荧光PCR法。然后采用不同ROS1基因融合的假病毒质粒作为质控品,评价方法的准确性、检测限和特异性。检测350例临床样本,并与直接测序结果进行比较,评价方法的临床适用性。结果:建立的ROS1融合基因PCR-荧光探针法,能准确检测出14种不同的ROS1融合基因;检测限是不高于总量0.01μg的RNA模板;正常人RNA的结果显示为融合突变阴性。临床样本的结果与测序结果的一致性好,Kappa值为1.00。结论:建立的ROS1融合基因检测方法具有很好的准确性、检测限和特异性,并且具有很好的临床适用性。