摘要：目的表达与纯化去唾液酸糖蛋白(ASGPR),为后续作为糖识别工具研究糖基化修饰的功能奠定基础。方法选择Nde I和Xho I作为限制性内切酶切割位点,使用SnapGene设计的上下游引物,以cDNA为模板,通过PCR扩增ASGPR基因。将扩增产物与经酶切的质粒pET-30a(+)使用一步克隆试剂盒进行重组。将重组产物转化到感受态大肠杆菌DH5α中,随后,将转化后的细菌溶液涂布在含有卡那霉素的LB平板(LBK板)上,以筛选出抗性菌落。之后,提取质粒并将重组质粒转化到表达菌BL21(DE3),筛选出抗性菌落,并进行测序验证。随后,进行ASGPR的小量诱导和蛋白的大量表达,接着进行蛋白包涵体复性过程。最后,收集不同的肿瘤细胞裂解液作为样品,利用纯化后的ASGPR蛋白作为糖识别工具,通过免疫印迹实验验证ASGPR的糖结合活性。结果重组质粒pET-30a(+)-ASGPR构建成功,通过免疫印迹实验证明ASGPR具有对GalNAc末端糖基化修饰的结合活性。结论基于O-GalNAc修饰(Tn抗原)的变化与多种疾病密切相关,所以高纯度且具有结合Tn抗原的ASGPR在未来对研究这种修饰功能具有巨大的推动作用。

摘要：教师的核心职责,不仅仅局限于教授学生专业知识,更在于“育人”这一深远而重大的使命上。“五育并举”的教育理念对于培养德智体美劳全面发展的人才至关重要。为了贯彻总书记在全国高校思想政治工作会议上强调的将“思政元素”在教育教学中进行融合,本文就如何将免疫学与课程思政融合进行设计与探索,加强专业课程与思政教育的结合。The core responsibility of teachers is not only limited to teaching students professional knowledge, but also lies in the far-reaching and important mission of “educating people”. The educational concept of “The Five Cultivations Simultaneously” is very important for cultivating talents with all-round development of morality, intelligence, physique, aesthetics and labor. In order to implement what General Secretary emphasized at the National Conference on Ideological and Political Work in Colleges and Universities, that is, to integrate “ideological and political elements” in education and teaching. This paper designs and explores how to integrate immunology with ideological and political courses in curriculum, and strengthen the combination of professional courses and ideological and political education.

摘要：来自空肠弯曲菌的β1,3-半乳糖基转移酶(CgtB)主要负责蛋白质O-连接糖基化的第二步延伸,在O-连接N-乙酰半乳糖胺(O-GalNAc)修饰后面添加一个半乳糖,目前CgtB已经被广泛应用于体外O-连接糖基化的合成。为了开发O-GalNAc修饰的识别工具,CgtB蛋白质用于突变体设计。在基因水平删除N端30个氨基酸及C端的30个氨基酸得到Cgt1,将Cgt1构建在pMal-c5x表达质粒上并通过大肠杆菌进行原核表达。可溶性的Cgt1经过麦芽糖结合蛋白(MBP)亲和层析柱进行纯化并利用糖结合实验进行活性分析。结果显示,大肠杆菌体系可以成功表达可溶性重组Cgt1蛋白质,相对分子质量约为70000,重组的Cgt1具备结合O-GalNAc修饰蛋白质的活性;针对不同的标准糖蛋白,Cgt1只识别含有O-GalNAc修饰的黏蛋白(mucin);对于复杂的细胞样品,Cgt1可以特异性识别细胞内的O-GalNAc修饰。该研究开发的识别O-GalNAc修饰工具,为进一步研究O-GalNAc修饰的功能奠定了基础。

摘要：设计一对3′端互补、5′端带酶切位点的引物,用PCR扩增唾液富组蛋白5(H5)基因(h5),将载体pGEX4T-2和h5双酶切、连接、转化DH5α,将筛选鉴定的重组质粒pGEX4T-2-h5转化BL21(DE3)。诱导重组菌BL21(DE3)-pGEX4T-2-h5表达,纯化融合蛋白GST-H5,用Thrombin切去GST标签获取重组H5(rH5),测试rH5抗白色念珠菌(Candida albicans)活性。试验成功构建了重组载体pGEX4T-2-h5,在37℃重组菌BL21(DE3)-pGEX4T-2-h5生长至OD600 nm=0.6时用1 mmol/L IPTG于20℃诱导9 h,可获得高水平表达的融合蛋白GST-H5;酶切后获得的rH5对白色念珠菌生长有较强的抑制作用,rH 5产率约2 mg/L。

摘要：目的了解某医学院大学生对艾滋病相关知识的认知、态度和获取途径,为在大学生中开展艾滋病健康教育活动提供科学合理的依据。方法自行设计艾滋病调查问卷,采用分层整群随机抽样的方法,对某医学院在读1 335名大学生进行匿名调查,调查数据应用SPSS14.0统计软件进行统计分析。结果艾滋病基本知识和传播途径的认知水平高年级高于低年级医学生,差异有统计学意义;对艾滋病感到紧张恐惧和认同婚前同居行为两项的认知率,高年级与低年级医学生比较差异有统计学意义;互联网、教师和纸质媒体是医学生获取艾滋病知识的主要途径;其获取知识途径高年级与低年级医学生比较,差异有统计学意义。结论不同年级的医学生对艾滋病认知、态度和获取途径等方面均存在差异,应结合具体情况,制定合适的艾滋病宣传教育措施,以培养他们正确的性观念和生活方式。

摘要：设计合成了基于BODIPY母核的简单化合物I_(2)-BODIPY,通过核磁共振波谱法、高分辨质谱法(HRMS)对其进行了表征。1,3-二苯基异苯并呋喃(DPBF)检测单线态氧实验表明I_(2)-BODIPY在溶液中有良好的活性氧(ROS)释放能力。以不同浓度的BODIPY、I_(2)-BODIPY(0、0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L)处理胶质瘤U87、U251细胞。MTT法验证BODIPY、I_(2)-BODIPY能剂量依赖性地抑制胶质瘤细胞的增殖。在绿光(520 nm)照射下I_(2)-BODIPY对U87(IC 50=1.21μmol/L)、U251(IC 50=0.54μmol/L)细胞具有优异的光动力活性。JC-1法证明BODIPY、I_(2)-BODIPY能诱导细胞线粒体膜电位丧失进而触发U87和U251细胞早期凋亡,其机制可能是光照产生的大量ROS氧化破坏了线粒体膜,进而诱导细胞凋亡,发挥其抗胶质瘤活性。

摘要：目的表达人6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)并建立其体外抑制剂筛选模型。方法设计一对5′端分别带NdeⅠ、XhoⅠ位点的引物,PCR扩增G6PD cDNA。将cDNA和质粒pET-28a经NdeⅠ+XhoⅠ酶切后连接,连接产物转化大肠杆菌Top10。将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.4 mmol/L IPTG诱导G6PD表达,镍离子亲和层析柱纯化G6PD。以6-磷酸葡萄糖(G6P)和烟酰胺腺嘌呤核苷二磷酸(NADP+)为G6PD的底物和辅因子,检测340 nm波长处光吸收值(A_(340))的变化,确定G6PD及其抑制剂脱氢表雄酮(DHEA)的最佳浓度,计算模型的可靠性指数—Z′因子。结果构建了重组质粒pET-28a-G6PD,重组菌BL21(DE3)-pET-28a-G6PD经IPTG诱导后,可溶性G6PD表达量为2.5 mg/L,G6PD、DHEA的最适浓度分别为900μg/L、20μmol/L,筛选模型的Z′因子为0.88。结论在大肠杆菌中表达了有活性的G6PD,建立了可靠的体外抑制剂筛选模型。

摘要：开展病原生物学综合性设计性实验教学有利于学生综合素质的提升,将思维导图引入病原生物学综合性设计性实验教学中,不但更新了教学方法,还促进了学生的自主学习能力、综合应用能力及创新思维的培养,并实现“以学生为中心”的教学理念。但是,只有在实践中根据教学实际需要合理、适当地应用思维导图辅助教学,才能实现教学效果的提升。

摘要：目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)参与肝癌发生发展的驱动作用及机制。方法通过使用Oncomine数据库进行数据挖掘分析PELP1在肝癌细胞株或组织中的表达状态,Western blot予以验证。设计并合成3对siRNA沉默肝癌中PELP1的表达,采用Western blot检测转染成功与否。使用成功转染PELP1-siRNA后的细胞株HepG2进行细胞活力实验、平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell小室侵袭和迁移实验。Western blot实验检测敲除PELP1后STAT3信号通路表达水平的变化。结果PELP1在肝癌中呈现高表达,通过siRNA沉默PELP1后显著抑制了肝癌细胞的生长活力、侵袭和迁移能力,降低了其恶性程度。Western blot显示将肝癌中PELP1沉默后,降低了磷酸化STAT3的表达。结论PELP1可能参与肝癌的发生发展,具有作为肝癌治疗靶点的潜在价值,参与调控STAT3的激活,从而促进肝癌细胞的生长。

摘要：《生物化学》是一门重要但较难理解和记忆的课程。本研究以微助教为平台,将案例与思维导图相结合运用于生物化学教学活动中,设计了与《生物化学》课程知识相关的案例。引导学生以案例为媒介,以思维导图为工具,构建一个围绕“基础知识”、“拓展知识”、“相关科学研究”逐层展开的知识网络,形成一个完整的学习过程。研究结果表明,案例结合思维导图的教学法能够有效提高学生的生物化学核心知识掌握程度、创新能力和团队合作能力,同时也能激发学生的学习兴趣和主动性,提升教师的教学水平和满意度。本研究为《生物化学》的教学改革提供了一种新的思路和方法。