摘要：目的建立一种检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。方法设计针对甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒HA基因的引物,分别进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应,同时进行熔解曲线和Tm值分析,并作灵敏度和重复性试验。结果该方法与H5、H7、H9亚型流感病毒及副流感病毒1、2、3型均无交叉反应。构建的荧光定量标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为:95.588%,检测灵敏度为101copies/反应体系,结果重现性好。成功地验证性检验了32份盲样标本。结论本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法敏感、不需荧光标记探针、成本低及高通量,能用于人类流感病毒的分型检测。

摘要：目的了解出国人员对艾滋病知识的认识状况和态度。方法以无记名方式填写专门设计的艾滋病调查表,第一部分为调查对象的一般人口学资料;第二部分为选择问题,问卷回收后,用EPI1 VERS10N6.02软件分析。结果问卷回收率为96.88%,对艾滋病基本知识的18个问题中,回答正确率在80%以上的有10题;67.7%的人不认为艾滋病是目前我国主要的公共卫生问题;74.1%的人对人类最终能控制艾滋病持乐观态度。结论此次调查再提醒我们,对出国人员的艾滋病预防健康教育应当做到重点突出,深入和持久。

摘要：目的建立鉴别诊断恶性疟原虫(P.f)和间日疟原虫(P.v)的多重巢式PCR法。方法针对P.f、P.v 18S rRNA基因设计外引物和内引物,优化引物浓度与退火温度,建立可扩增出两种疟原虫基因片段的多重巢式PCR,并检测54例疑似疟疾临床标本,以镜检法为金标准评价敏感性和特异性等指标。结果该方法可扩增出162 bp(P.f)和112 bp(P.v)基因片段,并能检出混合感染。该方法检测P.f,敏感性为87.50%、特异性为63.33%;检测P.v,敏感性为69.23%、特异性为68.29%。结论所建立的多重巢式PCR方法能可靠诊断疟疾并鉴别虫种,敏感性高,在混合感染的诊断方面具有优越性。

摘要：目的建立一种简便快速、能同时检测恶性疟和间日疟的核酸检测方法。方法针对两种疟原虫18SrRNA基因设计2对(3条引物),优化引物浓度与退火温度,建立可扩增出两种疟原虫基因片段的多重PCR。并进行最低检测限确定和临床标本检测,以镜检法为金标准分析灵敏度和特异度等指标。结果该方法可扩增出431bp(恶性疟原虫)和341bp(间日疟原虫)基因片段,最低检测限为102copies/反应,检测临床标本的结果与镜检法无差别(P>0.05),敏感度为93.55%,特异度为70.83%,阳性预测值为89.23%,阴性预测值为80.95%。结论所建立的多重PCR方法可快速检测疟疾感染并鉴别分型,灵敏度高,值得推广。

摘要：目的针对香港海鸥形菌,利用同源加尾系统(Homo-Tag Assisted Non-Dimer,简称HAND)建立一种基于改良分子信标的荧光PCR检测方法,并对这种方法进行条件优化和评价。方法根据香港海鸥形菌的基因保守序列16SrDNA基因设计探针和特异性引物,并在引物的5’端加上同源尾巴序列,减少或避免引物二聚体的形成,通过优化通用尾巴引物和特异性加尾引物的浓度与反应温度等PCR参数构建荧光PCR的反应体系。结果建立的基于HAND系统的改良分子信标PCR的检测体系引物二聚体明显减少,检出限达到20CFU/ml。结论建立的基于HAND系统的改良分子信标荧光PCR检测方法具有检测时间短、灵敏度高、特异性好的优点,能够应用于香港海鸥形菌的快速筛查。

摘要：目的建立一种可以同时检测人类新甲型H1N1、季节性H1N1和H3N2亚型流感病毒及乙型流感病毒的多重PCR方法。方法根据以上4种流感病毒的特异性基因设计4对引物,建立可同时扩增出4个流感病毒特异性片段的多重PCR的方法。用人的GAPDH基因作为内参判断标本来源和实施质量控制的依据。并进行敏感性、特异性和盲样检测评价实验。结果该方法可同时扩增出流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为106 bp(新甲型H1N1)、135 bp(季节性H1N1)、118 bp(季节性H3N2)、170 bp(乙型流感病毒)。该实验检测新甲型H1N1(A/colifornia/07/2009)的敏感性为102copies/反应。特异性实验结果显示每对引物只检测对应的病毒,32份盲样检测结果特异性好。结论该多重PCR方法可同时检测新甲型H1N1及季节性流感病毒,敏感性、特异性强,可用于人类流感病毒的鉴别分型检测。

摘要：目的建立一种快速检测结核分枝杆菌的方法,并探讨其临床应用价值。方法以结核分枝杆菌细胞色素氧化酶(CYP141)基因为靶点设计多对引物和探针,用BLAST软件分析其特异性,优化PCR反应条件,用国家标准品(阴性参考品15份、阳性参考品15份、最低检出量参考品4份及重复参考品10份)和124份经培养鉴定的临床样本(结核分枝杆菌阳性75份)验证方法的可靠性和临床应用价值。结果国家阴性和阳性参考品的符合率均为100%,最低检出量参考品为不高于1×10~2cfu/ml;10份重复参考品均呈阳性,对临床样本检测的灵敏性和特异性分别为96.00%、97.96%,总符合率为96.77%,一致性好(Kappa值=0.933;χ~2=104.21,P<0.001)。结论建立了结核分枝杆菌通用型核酸检测方法,适用于卫生检疫系统和临床实验室应用。

摘要：目的建立耐药结核分枝杆菌的多重Taqman-MGB探针检测体系。方法针对结核分枝杆菌抗结核一线药物突变位点[利福平:Rpo B(526)/(531);乙胺丁醇:emb B(306);异烟肼:Kat G(315)、inh A(-15);链霉素:Rpsl(43)]设计并合成引物探针;构建耐药结核分枝杆菌野生型和突变型模板,对其进行梯度稀释;配制结核分枝杆菌耐药基因检测试剂,用不同类型模板进行检测;检测72例结核样本(耐利福平20株,耐异烟肼22株,耐链霉素1株,耐多药17株),并与罗氏药效试验结果比较。结果该检测体系可同时检测6个结核突变位点,最低检测限为10~4拷贝/m L,对临床样本检测其总符合率为100%,一致性好(x^2=137.3,P<0.001)。结论本研究建立了耐药结核分枝杆菌的快速检测方法,可较好应用于卫生检疫系统和临床实验室。