摘要：目的:从茯苓中克隆参与茯苓三萜合成路径中的潜在关键限速酶鲨烯环氧酶(SE),并对其进行生物信息学及表达分析。方法:采用试剂盒提取总RNA,反转录为cDNA,设计特异性引物,以cDNA为模板,进行SE基因的克隆,对该基因进行生物信息学分析。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检查茯苓鲨烯环氧酶基因(PcSE)在茯苓神舟10号、湘靖28、5.78菌株中的表达。结果:PcSE的基因全长为1 571 bp,包含4个外显子,3个内含子。获得编码区域(CDS)序列长为1 413 bp,编码470个氨基酸。该蛋白为疏水性蛋白,无信号肽,有2个跨膜结构域,具有FAD/NAD(P)结合域和鲨烯环氧酶结构域,定位于线粒体或质膜上。与多孔菌科真菌的同源序列比对一致性为80.92%;系统进化树显示PcSE蛋白与美国茯苓的亲缘关系最近。Real-time PCR结果显示,PcSE基因在3个菌株中均有表达,在5.78菌株中的表达量最高,3个菌株的PcSE表达差异不存在统计学意义。结论:首次从茯苓中克隆并分析茯苓PcSE基因,为进一步研究茯苓PcSE的功能及解析茯苓三萜生物合成途径提供了基础。

摘要：目的通过研究眼镜蛇性状、鉴别、检查等项目,建立眼镜蛇特异性鉴别方法,完善眼镜蛇药材地方标准,探讨其列入行业、地方或国家标准的可能性。方法收集眼镜蛇、蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇等共3科6属8种23条蛇类,对眼镜蛇进行外观性状和显微鉴别研究;通过比对GenBank数据库中收集蛇类的线粒体COI基因序列,设计眼镜蛇特异性引物,提取DNA进行PCR扩增及电泳检测,并对其特异性和适用性进行了考察与验证;测定了眼镜蛇水分、灰分、浸出物等检查项目,完善眼镜蛇质量标准。结果眼镜蛇外观性状鉴别要点为“颈背部具眼镜状白色斑纹”“腹前段有1个黑褐色横斑,横斑前有1对黑色斑点”等,显微特征有角质鳞片、表皮、横纹肌、骨陷窝、骨小管等;眼镜蛇特异性引物YJS203-F/YJS303-R能够准确鉴别出眼镜蛇及其他蛇类;16批眼镜蛇样品的水分、灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的平均值分别为5.71%,21.10%,0.16%,20.32%,13.16%。结论COI基因序列能够对眼镜蛇进行特异性鉴别,该方法快捷高效、结果准确;在原有地方标准的基础上,完善了眼镜蛇药材的质量标准,为眼镜蛇药材质量评价体系的制定和完善提供科学依据。

摘要：目的:优选复方三七降脂滴丸成型工艺。方法:运用Box-Behnken中心组合设计试验,在单因素试验的基础上,以滴速、滴制温度、滴距为自变量,滴丸的溶散时限、重量差异、外观评分的总评归一化值(OD)为因变量,利用响应曲面法进行分析,选出最佳成型工艺条件并进行验证试验。结果:复方三七降脂滴丸最优成型工艺条件为:PEG4000与PEG6000配比为3∶1,药物与基质配比1∶4,滴速为30~40滴/min,滴制温度80℃,滴距4 cm。结论:本试验采用Box-Behnken设计-响应面法优选的复方三七降脂滴丸成型工艺方法稳定、可行。

摘要：高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)是一种由于嘌呤代谢异常或尿酸排泄减少所致的代谢性疾病,以血尿酸(serum uric acid,SUA)、尿氮素(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(serum creatinine,SCr)水平升高等为主要临床特征,长期高尿酸血症与痛风性关节炎、糖尿病、高血压以及肾脏损伤等多种疾病的患病风险增加密切相关,因此控制血尿酸水平可能是延缓和防治高尿酸血症及合并症进程的有效措施。中医药以整体辨证论治观为基础,具有一药多效、作用靶点广泛的优势,在高尿酸血症的治疗中具有很高的应用价值;近年来,肠道微生物及代谢产物调控成为代谢性疾病领域的研究热点,随着对肠道微生物研究的不断深入,发现中药通过多种途径参与肠道菌群及代谢产物调控并改善高尿酸血症,该文从中药活性成分、单味中药及中药复方调节肠道菌群及代谢产物角度,对其抗高尿酸血症的作用与机制研究进展进行综述,以期为中医药抗高尿酸血症研究提供参考。

摘要：目的利用微卫星分子标记技术对杜仲居群遗传多样性及亲缘关系进行研究。方法对设计的29对EST-SSR引物以及20对已发表的杜仲SSR引物进行筛选,获得的高多态性引物对不同产区杜仲的125个个体进行遗传多样性及亲缘关系分析。结果筛选得到的18对引物共扩增出74条清晰带。Nei's基因多样性指数H=0.3750,Shannon's多态性信息指数I=0.5512。基因分化系数Gst=0.1149。湖南石门与桑植之间有一定的亲缘关系,重庆秀山与陕西略阳之间遗传距离最大。结论杜仲居群内具有丰富的遗传多样性,而不同群体间的遗传多样性低,居群间存在较大基因流。

摘要：目的:通过参附注射液作用于异丙肾上腺素诱导的心衰大鼠模型以证实其是否可通过血管加压素(AVP)逃避改善心衰后的水液代谢。方法:除空白对照组外,其余大鼠用异丙肾上腺素制作心衰模型,监测大鼠尿量、体重,随后将成模大鼠随机分为:模型对照组、参附10 ml/kg组、螺内酯20 mg/kg组、参附20 ml/kg+螺内酯20 mg/kg组、参附10 ml/kg+螺内酯20 mg/kg组、参附5 ml/kg+螺内酯20 mg/kg组。大鼠处死前,从主动脉采血,检测大鼠血管加压素(AVP)和N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平;通过荧光定量PCR和Western Blot对大鼠肾髓质水通路蛋白-2(AQP-2)、血管加压素受体-2(V_(2)R)的mRNA和蛋白表达进行检测。结果:造模时,与空白对照组相比,造模大鼠体重增多,尿量减少(P<0.05),血清AVP、NT-proBNP含量明显升高,V_(2)R mRNA上调,蛋白下调,AQP-2蛋白上调(P<0.05或P<0.01)。用药后,与模型对照组相比,螺内酯20 mg/kg组和参附20 ml/kg+螺内酯20 mg/kg组、参附10 ml/kg+螺内酯20 mg/kg组、参附5 ml/kg+螺内酯20 mg/kg组的尿量均明显升高(P<0.05);各组AVP含量明显降低(P<0.05);V_(2)R mRNA、NT-proBNP含量、AQP-2、V_(2)R蛋白表达明显下调(P<0.05)。与3个联合组相比,其他各组AQP-2、V_(2)R蛋白表达均明显上调(P<0.05)。结论:参附注射液能够改善心衰大鼠的水钠潴留,与降低AVP及其受体V_(2)R的表达有关,这是对水钠潴留作用的逃避机制;但参附注射液的利尿作用有限,可能不及螺内酯,需要与传统利尿剂合用才能产生强大的利尿效果。

摘要：目的:应用响应面法优化丹参毛状根诱导条件,提高其诱导率。方法:采用发根农杆菌ATCC15834侵染丹参无菌苗获得毛状根,在单因素实验的基础上,利用Box-Benhnkcn设计和响应面分析方法对丹参毛状根诱导过程的培养条件(叶片大小、农杆菌活力、侵染时间、共培养时间、抗生素浓度)进行分析,优选最佳培养条件。结果:丹参毛状根在无外源激素的MS培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根的最优培养条件为:叶片大小0. 8cm2,农杆菌OD600为1. 0,共培养时间2d,农杆菌侵染时间5min,头孢噻吩浓度400ng/L。在此条件下,丹参毛状根的诱导率为69. 8%。结论:该研究优化了丹参毛状根的培养条件,为丹参的进一步开发利用提供了依据。

摘要：采用正交设计法,对舒心滴丸的提取工艺进行了研究,选择了乙醇浓度、加醇量、回流时间作为考察因素,设计3个水平,按L9(34)正交表安排试验,以人参皂苷Rg1的提取率作为评价指标,确定了红参、三七的最佳提取工艺。以粒度、加水量、提取时间作为考察因素,以挥发油得率作为评价指标,确定了丁香、肉桂的最佳提取工艺。

摘要：目的:优选南宝戒毒清胶囊的最佳提取工艺条件。方法:以浸膏得率及黄芪甲苷、细叶远志皂苷提取量为综合评价指标,选择药材粒度、浸泡时间、提取次数、提取时间、溶剂倍数为考察因素,采用Plackett-Burnman设计对考察因素进行初步筛选,进一步通过Box-Behnken效应面法对提取工艺参数进行优化。结果:优选得到的南宝戒毒清胶囊最佳提取工艺为:加水提取2次,第一次加12倍水,提取2h;第二次加10倍水,提取1.5h。结论:采用Plackett-Burnman设计结合Box-Behnken效应面法优出的南宝戒毒清胶囊提取工艺经验证为合理可行,预测性和重复性均良好,可为工艺大生产提供依据。

摘要：目的对双百安神胶囊提取工艺进行优化。方法以酸枣仁总皂苷、干膏得率为评价指标,以加醇量、乙醇浓度、提取时间为考察因素,采用Box-Behnken-效应曲面法,优选双百安神胶囊提取工艺参数。结果通过Box-Behnken设计效应面法所得模型优化提取条件为:第1次加7倍量60%乙醇,提取2 h;第2次加6倍量60%乙醇,提取1.5 h。结论采用效应面法优选的双百安神胶囊提取工艺合理可行。