摘要：目的分析鱼腥草Houttuynia cordata转录组中的SSR位点信息,并设计简单重复序列(SSR)引物,以期为鱼腥草分子标记辅助育种提供有力工具。方法利用MISA工具筛选了鱼腥草转录组测序获得的63 954条unigenes,对其SSR位点信息进行了分析;在此基础上利用Primer 3设计SSR引物,并随机选择50对SSR引物对16株不同来源的鱼腥草进行多态性扩增分析。结果在鱼腥草的转录组中,共搜索到4 800个SSRs,分布于4 413条unigenes,SSR位点出现频率为7.51%。SSRs位点中三核苷酸重复是主要类型,占总SSRs的41.54%;其次是单核苷酸重复基序(占27.35%)。SSRs所包含的重复基元中,单核苷酸重复基元A/T是优势重复基元类型,占总SSRs的27.0%。利用Primer3共设计出3 068对SSR引物。随机选择50对引物进行PCR扩增,其中43对(86.0%)扩增出清晰、可重复的条带,且表现出多态性。利用UPGMA作图,将16个样品分为2类。结论鱼腥草转录组中SSR位点出现频率高,类型丰富;大量的SSR为其遗传多样性分析和遗传图谱构建奠定基础。

摘要：目的克隆鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1(DXS1)基因并分析其表达差异。方法根据已经获得的鱼腥草DXS1转录本序列设计1对引物,采用RT-PCR方法获得DXS1基因cDNA序列并对DXS1蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预测了该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了DXS1基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的DXS1基因长为2 172 bp,编码723个氨基酸。生物信息学预测DXS1蛋白不含跨膜区,不含信号肽,具有定位肽。DXS1基因在鱼腥草的花中表达丰度最高,其次是叶片,再次是地下茎,地上茎中表达量最低。结论首次从鱼腥草中克隆了DXS1基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。

摘要：目的对显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata查耳酮合成酶(CHS)基因进行克隆及序列分析。方法根据已经克隆的植物基因的保守序列设计一对引物,以显齿蛇葡萄总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增CHS基因序列并连接到pMD18-T Simple载体上,阳性克隆经PCR检测后进行测序。结果得到一段1 173 bp的序列,序列分析表明,该片段编码390个氨基酸,与其他高等植物CHS基因氨基酸序列同源性在67.9%以上。结论首次从显齿蛇葡萄中克隆了CHS基因,为有效利用该基因奠定了基础。

摘要：目的建立并优化天门冬ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨天门冬种质间遗传多样性提供依据。方法采用单因子试验和正交设计法,研究Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响。结果天门冬ISSR-PCR的最佳反应体系为25μL的反应体系中含模板DNA 40 ng、Mg2+1.25 mmol/L、dNTP 320μmol/L、引物1.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U。在此基础上,从50条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。结论建立的天门冬ISSR-PCR反应体系,经过17份天门冬种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于天门冬遗传分析。

摘要：根据已经获得的鱼腥草UGT75C1转录本序列设计1对引物,采用RT-PCR方法获得UGT75C1基因cDNA序列,并对UGT75C1蛋白进行理化性质分析,并预测该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了UGT75C1基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况,将克隆得到的UGT75C1基因完整开放阅读框连接到原核表达载体pGEX4T-1上,转化大肠杆菌*** BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。克隆获得的UGT75C1基因长为1 787 bp,开放阅读框1 461 bp,编码486个氨基酸。生物信息学预测UGT75C1蛋白含跨膜区,不含信号肽,具有糖基转移酶的PSPG motif。UGT75C1在鱼腥草的叶片中表达丰度最高,其他器官中表达量相对较低,花中表达量最低;该基因原核表达产物与预期大小一致,显示原核表达成功,为下一步研究其功能奠定了基础。

摘要：为获得接骨草叶中绿原酸的最佳提取工艺，比较了水煮法、乙醇浸提法、超声波辅助提取法和索氏提取法提取接骨草叶中绿原酸，用紫外分光光度法测定其含量。结果表明，从接骨草叶中提取绿原酸的最佳方法为超声辅助提取法。通过设计正交实验得到超声波提取法的最佳提取工艺是乙醇浓度为80％，固液比为1：45（g／mL），超声波辅助提取时间为45min，而各因素对提取绿原酸的影响依次为固液比〉乙醇浓度〉超声辅助提取时间。在最佳提取条件下，一年中6.11月间接骨草叶中绿原酸得率分别为1.852％、1.995％、1.944％、1.891％、1.803％和1.742％，故采收接骨草叶提取绿原酸的最佳月份是7月。

摘要：利用超声波辅助提取法提取接骨草花中乌索酸。通过考察乙醇浓度、固液比、超声波时间对提取乌索酸得率的影响,设计正交实验,得出最佳提取工艺。结果表明各因素对提取乌索酸的影响依次为乙醇浓度>固液比>超声时间。最佳提取工艺是乙醇浓度为80%,固液比为1∶60g/mL,提取时间为45min。在此条件下,乌索酸在盛花期中得率为0.83%,在花蕾期中得率为0.81%。

摘要：目的克隆鱼腥草查耳酮合成酶1(CHS1)基因并分析其蛋白质序列。方法根据已经克隆的植物CHS基因的保守序列设计一对引物,以鱼腥草总RNA为模板,采用RT-PCR和SON-PCR的方法快速获得CHS基因序列并连接到pMD18-T Simple载体上,阳性克隆经PCR检测后进行测序。结果得到一段1 188 bp的序列,序列分析表明,该片段编码395个氨基酸,与其他高等植物CHS基因氨基酸序列同源性在62.3%以上,生物信息学分析表明,该蛋白含有CHS家族的特征多肽序列"RLMMYQQGCFAGGTVLR"和"GVLFGFGPGL",不含信号肽序列。相对荧光定量PCR分析表明,CHS1基因在花中的表达量最高,其次是地上茎,再次是地下茎,叶片中表达量最低。结论首次从鱼腥草中克隆了CHS1基因,为有效利用该基因奠定了基础。

摘要：为了更精确有效地鉴定西红柿种质，根据番茄的45S rDNA序列设计引物，以西红柿基因组DNA为模板通过PCR方法扩增出ITS（internal translation spacer）序列，在克隆测序的基础上对番茄属两个野生种与三个栽培种进行分子鉴定与亲缘关系分析。结果表明：（1）五个供试材料ITS序列的变异小，GC含量高，为57.0%~65.4%。（2）用不同的聚类方法分析发现三个栽培种供试材料亲缘关系较近，而野生种醋栗番茄（Solanum pimpinellifolium）都处于不同的分支类群，表明其与其他品种亲缘关系相对较远，同时发现其生物学特性与其他品种明显不同。

摘要：利用CODEHOP设计CCoAOMT基因的简并引物,通过RT-PCR的方法,从杉木茎段中克隆到1个长度为614 bp的PCR产物,产物经pMD18-T载体克隆转化至DH5α大肠杆菌中,序列通过同源性比对后显示该片段与其它植物的CCoAOMT基因具有较高的同源性.利用生物信息学方法分析发现,该序列在112－651 bp片段上有一个开放性阅读框,该序列编码的是一个酸性蛋白,亲水性较弱,疏水性较强;信号肽序列为第23位至第45位,二级结构以α-螺旋（40.62%）与不规则盘绕（45.31%）为主,没有发现β转角区域.