摘要：目的探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡和耐药的影响。方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体(Lip)介导转染K562细胞,实验分为Lip-ASODN组、Lip-MSODN组、Lip对照组和细胞对照组4组,采用反转录-PCR法检测Livin mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法与膜联蛋白V异硫氰酸荧光素法检测Livin ASODN与K562细胞增殖、凋亡及与高三尖杉酯碱(HHT)耐药的关系。结果 Livin ASODN可显著抑制K562细胞增殖(P0.05)。Livin ASODN可增加K562细胞对HHT的耐药性,半数抑制质量浓度为(0.37±0.02)mg.L-1;与HHT及小剂量阿糖胞苷联合应用可显著抑制细胞增殖(P<0.01)。结论 Livin ASODN可下调Livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,增加K562细胞凋亡及其对HHT的敏感性。

摘要：目的探讨Apollon反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响。方法设计合成特异性的Apollon硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(missenseoligonucleotide,MSODN),脂质体介导转染K562细胞后,采用MTT法检测K562细胞增殖,AnnexinV-FITC法检测细胞的凋亡。结果 Apollon反义寡核苷酸对K562细胞的生长抑制呈浓度-时间依赖性。Apollon ASODN在终浓度为600nmol/L作用K562细胞时,能明显抑制其增殖,K562细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论 Apollon反义寡核苷酸可下调Apollon基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞凋亡。

摘要：目的采用小干扰RNA(siRNA)沉默HOXA9基因,探讨siRNA转染后人白血病细胞株U937能否逆转化疗药物的耐药性。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链,应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组:实验组(脂质体转染靶向HOXA9的siRNA)、细胞对照组(仅加等量细胞及培养基)和阴性对照组(脂质体转染阴性对照siRNA)。利用反转录(RT)-PCR法、蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、流式细胞术检测U937细胞转染前后对长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)的敏感性及凋亡率变化。结果靶向HOXA9的siRNA可有效沉默HOXA9的表达,HOXA9 mRNA及蛋白相对水平明显下降。siRNA转染后实验组U937细胞可明显增加对VCR、VP-16的敏感性,实验组细胞的半数抑制浓度值显著低于细胞对照组及阴性对照组(Pa0.05)。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默HOXA9基因表达,增加其对VCR、VP-16的敏感性,能逆转白血病细胞对化疗药物的耐药性。

摘要：目的设计合成及筛选自身免疫关键基因——chl—b（Casitas B-cell lineage lymphoma-b,cbl—b）基因小分子干扰RNA（siRNA）。方法应用RNA设计软件，模拟cbl—b小鼠cbl—bmRNA二级结构，设计并合成针对cbl—bmRNA的4对21核苷酸（nt）siRNA，96孔板转染小鼠淋巴细胞，以空白及转染非特异siRNA（与cbl—bmRNA无同源性的21ntsiRNA）作为对照，应用蛋白免疫印迹（Western blot）方法检测小鼠淋巴细胞cbl—b蛋白表达。结果cbl—b基因siRNA工作浓度为100nmol／L时转染小鼠淋巴细胞转染率最高，可达（87．48±1．94）％，平均荧光强度最强，可达33．09±1．77。与对照相比，转染cbl—b siRNA的小鼠淋巴细胞蛋白表达明显下调，以siRNA-4最显著，抑制率达85％，转染非特异性siRNA的小鼠淋巴细胞cbl—b蛋白表达水平无明显变化。结论得到cbl—b siRNA转染小鼠淋巴细胞最佳转染条件，成功筛选能高效抑制cbl—b蛋白表达的siRNA-4，其有效抑制时间约为48h，有望通过沉默cbl—b基因直接活化淋巴细胞，增强机体主动免疫杀伤肿瘤细胞。

摘要：目的探讨Livin反义寡核苷酸（ASODN）对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响。方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN），脂质体介导转染K562细胞后，采用四甲基偶氮唑盐光吸收法（MTT）检测细胞增殖，AnnexinV—FITC法检测细胞的凋亡，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LivinmRNA的表达。结果LivinASODN在终浓度为600nmol／L作用K562细胞48h时，能明显抑制其增殖细胞增殖咖制率（IR）为（52．99±2．67）％]，降低LivinmRNA的表达[ODR为（59．75±3．24）％]，K562细胞凋亡率显著增加f（36．89±1．08）％]（P〈0．01），而Lip—MSODN组、Lip对照组与细胞对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LivinASODN可下调Livin基因表达，有效抑制K562细胞的增殖，并促进K562细胞凋亡。

摘要：目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞株增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链，应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组：实验组（脂质体转染靶向HOXA9的siRNA）、阴性对照组（脂质体转染阴性对照siRNA）和细胞对照组（仅加等量细胞及培养液）。利用反转录．聚合酶链反应法、Western blot法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染靶向HOXA9的siRNA后，实验组、阴性对照组、细胞对照组mRNA相对表达水平分别为、（22.980±0．548）％、（82．371±1．517）％、（8d．637±2．252）％（P〈0．05），蛋白相对表达水平分别为（50．377±2．773）％、（102．275±3．898）％、（107．510±3．905）％（P〈0．05）；siRNA转染后实验组U937细胞增殖明显受抑制且细胞凋亡率显著增高，24、48、72h增殖抑制率分别为（41．909±4．333）％、（54．470±3．756）％、（65．835±1．024）％，凋亡率为（26．800±2．081）％，与细胞对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默U937细胞HOXA9基因表达，明显抑制细胞的增殖并促进细胞凋亡，为临床白血病HOXA9基因靶向治疗提供了实验依据。