摘要：目的探讨热休克转录因子1(heat shock factor 1,HSF1)表达水平与MDR1、Cyclin D1、MMP-2、BCL-2的关系,以及对HCT-8/FU细胞株克隆和侵袭能力的影响。方法采用Western blot法检测HCT-8/FU细胞株及结肠腺癌非耐药细胞株HCT-8中HSF1及MDR1的表达。设计2条针对HSF1基因的干扰RNA表达载体及阴性对照载体,分别稳定转染HCT-8/FU细胞。采用RT-PCR及Western blot法检测各组中HSF1、MDR1的mRNA及蛋白表达量,并通过克隆实验及Transwell实验检测各组细胞生长情况和侵袭能力。通过CCK-8实验检测不同药物浓度中各组细胞的增殖活性。结果HCT-8/FU耐药细胞株中HSF1、MDR1的蛋白表达量均高于HCT-8细胞株,差异有统计学意义(P<0.01)。沉默HSF1的细胞中MDR1表达水平下降,而过表达HSF1细胞株中MDR1的表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.01)。CCK-8细胞增殖实验结果显示沉默HSF1可提高耐药细胞对化疗药物的敏感性,其细胞增殖活性降低(P<0.05)。与空白对照组相比,沉默HSF1后Cyclin D1、MMP-2与BCL-2表达降低,可明显抑制肿瘤细胞克隆及体外侵袭能力,过表达HSF1则可增强肿瘤细胞的克隆和体外侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.01)。结论结直肠癌中HSF1作为转录因子可促进肿瘤细胞的克隆及侵袭,同时其高表达可启动MDR1的转录与翻译,进而促进肿瘤耐药。

摘要：目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对mTOR、ULK1、LC3-B的表达以及对HCT116细胞株增殖与凋亡的影响。方法设计4条针对Beclin 1基因的干扰RNA表达载体及阴性对照载体分别瞬时转染HCT116细胞。采用RT-PCR及Western blot法筛选出1条抑制率最高的Beclin 1干扰序列后,瞬时转染HCT116细胞,检测mTOR、ULK1及LC3-B的mRNA及蛋白表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 (1)转染细胞后,BECN1-1245组mRNA及蛋白抑制率最高,达80%。(2)RT-PCR结果显示,BECN1-1245组转染细胞48 h后,与阴性对照组相比,ULK1与LC3-B mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P≤0.05),mTOR在两组中的表达无差异(P>0.05),Western blot法检测结果与之相同。(3)CCK-8细胞增殖实验显示,BECN1-1245组转染24、48、72 h后,细胞生存率较阴性对照组明显降低(P≤0.05)。(4)流式细胞仪检测结果显示,BECN1-1245组转染48 h后,与阴性对照组细胞相比,细胞凋亡率明显升高(P≤0.05)。结论 Beclin 1在HCT116细胞自噬中发挥重要的调控作用,抑制Beclin 1的表达,可抑制细胞的自噬活性,并能抑制细胞增殖,促进其凋亡,推测Beclin 1基因可作为结肠癌治疗的新靶点。

摘要：目的观察信号通路Sonic hedgehog（Shh）抑制因子Rab23的RNA干扰对人肝癌细胞株Huh7增殖和凋亡的影响。方法实验细胞分为转染组、隐性对照组和空白对照组。设计针对Rab23基因的siRNA，通过Liperfectemin2000将其转染进Huh7细胞株，噻唑蓝（MTT）比色法试验检测沉默Rab23基因后第0、8、16、24和48h的细胞数和MIT的D（λ）值；流式细胞术检测沉默Rab23基因48h细胞凋亡情况。结果转染组与空白对照组比较，加入siRNA后，8h时细胞增殖数无明显减少，16、24和48h时细胞数明显减少（P〈0．01），24、48h时细胞存活率差异有统计学意义。隐性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；Huh7细胞经siRNA作用48h后，可见亚二倍体核型峰-凋亡峰。其中，转染组凋亡率为28％，隐性对照组及空白对照组未见凋亡峰。结论Rab23对肝细胞癌的增殖起维持作用；通过沉默该基因可以抑制肝癌细胞增殖，并促进细胞凋亡。