摘要：目的构建LL-37慢病毒过表达载体,稳定转染RAW264.7细胞株,并检测LL-37在胞内mRNA和蛋白表达情况。方法根据GenBank数据库获取抗菌肽LL-37的蛋白编码基因序列,同时选择合适的酶切位点并设计特异性的上、下游引物,PCR扩增目的基因。用SalI、Age I限制性内切酶对载体和目的基因进行双酶切,将酶切目的片段与载体进行重组。重组质粒冰水浴30 min、42℃热激1.5 min、冰上放置2 min后转化入DH5α感受态细胞。将感受态细胞在不含氨苄的LB培养基中,37℃、200 r/min培养1 h。将转化菌在含氨苄平板上进行筛选,阳性菌落进行PCR和测序鉴定,鉴定正确的菌落进行扩增并大量抽提质粒。将20μg GV载体质粒、15μg pHelper 1.0载体质粒、10μg pHelper 2.0载体质粒与转染试剂混合后共转染293T细胞,收集细胞上清液,经离心、过滤后保存。将包装浓缩后的慢病毒按照MOI=100稳转RAW264.7细胞株,并用嘌呤霉素筛选LL-37慢病毒过表达RAW264.7细胞株。分别采用RT-PCR和间接免疫荧光技术检测转染成功的RAW264.7细胞中mRNA和蛋白表达情况。结果成功获得7487 bp的线性化载体和164 bp的LL-37PCR片段,成功构建LL-37慢病毒过表达载体。将重组质粒转化到DH5α感受态细胞中,经PCR和测序鉴定重组质粒构建正确。经包装浓缩后的慢病毒成功稳转RAW264.7细胞株,并用嘌呤霉素筛选出LL-37慢病毒过表达RAW264.7细胞株。RT-PCR检测携带重组质粒的慢病毒转染的RAW264.7细胞,胞内mRNA有良好表达丰度,LL-37基因的表达丰度为9074.883(P<0.01)。加入LL-37抗体的细胞株组在CQ1荧光拍照下能够观察到荧光,空白组和阴性对照组无此荧光,表明稳转LL-37 RAW264.7细胞株构建成功。结论成功构建LL-37慢病毒过表达载体并获得在胞膜及包浆均有大量表达LL-37的慢病毒稳转RAW264.7细胞株,为LL-37相关作用机制研究奠定了基础。

摘要：目的构建一种以猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)优势保护性抗原为基础的多表位疫苗。方法从NCBI网站获取9种MPXV蛋白的GenBank登录ID及其氨基酸序列;通过ABCpred、NetCTL 1.2和IEDB的MHC-I Immunogenicity模块分别预测9种MPXV蛋白的B、CTL及Th细胞(HTL)表位;采用IEDB的MHC I Binding模块预测各CTL表位与特定MHC-I类分子的亲和力;使用VaxiJen v2.0、ToxinPred、AllerTOP v.2.0分别预测所得表位的抗原性、毒性及致敏性,从中筛选出具有最高抗原性但无细胞毒性和致敏性的表位,其中,CTL表位选择IC_(50)值<30 nmol/L者,HTL表位选择IFN-γ预测值最好者;将上述各表位与RS09、PADRE、Pam2Cys三种佐剂随机连接并添加6×H(组蛋白)尾巴以构建多表位疫苗,从各连接组合中筛选出具有最高抗原性但无细胞毒性和致敏性的组合;通过ExPASy的Protparam与ProtScale模块分析其理化性质;通过PSIPRED预测其二级结构;使用I-TASSER进行多表位疫苗的三级结构模拟,然后使用ModeRefiner和GalaxyRefiner将模拟出的三级结构进行优化;使用ZDOCK serves将优化后的多表位疫苗与TLR2、TLR4受体进行分子对接处理,以观察其相互作用情况与对接位点;采用C-ImmSim行免疫模拟对疫苗的免疫效果进行评估。结果该MPXV疫苗包括9个B细胞表位、23个CTL细胞表位和9个HTL表位,组合方式为RS09-PADRE-B-Pam2Cys-HTL-CTL-6×H,其抗原性得分为0.6828,共包含675个氨基酸残基,相对分子质量(M_r)为74431.30,理论pI值9.36,分子式为C_(3473)H_(5267)N_(867)O_(920)S_(17),热稳定性好,亲水性强;二级结构中α螺旋占46.82%,β折叠占18.37%,无规则卷曲占34.81%;可与TLR2、TLR4分子稳定结合,还可诱导较强的体液与细胞免疫应答。结论运用免疫信息学方法成功构建一种含多个优势抗原表位的MPXV疫苗,可能对猴痘病毒感染有预防作用。

摘要：信息技术融入教学引发了一场课程改革——"翻转课堂(Flipped Classroom或Inverted Classroom)"的学习革命。从临床生化检验实验课程的教学现状和翻转课堂的核心理念入手,探索如何在高校中设计基于翻转课堂的临床生化检验实验课程的教学模式,并从教学理念的深层次上探析其实施过程中的关键因素。以先进的教学设计思想为特点的翻转课堂必将为信息时代的教学改革提供新的思路。

摘要：目的研究分枝杆菌噬菌体D29holin基因编码蛋白的理化特点及生物学特性,分析噬菌体抗结核菌的潜力。方法根据GenBank中登录的分枝杆菌噬菌体D29holin基因序列设计上、下游引物,以分枝杆菌噬菌体D29基因组为模板,PCR扩增holin基因,构建重组质粒pET32a-holin,进行双酶切鉴定、测序鉴定及生物信息学分析。结果 PCR扩增得到序列正确的holin基因产物并成功构建重组质粒pET32a-holin。进化分析显示分枝杆菌噬菌体D29holin基因与已知有尾分枝杆菌噬菌体Chy1、Chy4、Chy5holin基因亲缘关系较近。生物信息学分析显示,该基因编码Holin蛋白为稳定、疏水性蛋白,具有2个跨膜区域和亲水性C-端;二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主,有信号肽,蛋白序列中存在2个丝氨酸磷酸化位点。结论分枝杆菌噬菌体D29 Holin蛋白的两个跨膜区及亲水性C-端构象发生变化,有助于阐明Holin"定时"打孔及启动噬菌体裂解细菌的机制,为研发抗结核Holin多肽药物奠定了基础。

摘要：目的采用生物学信息方法分析预测结核分枝杆菌Mce4A蛋白的结构和功能。方法登录NCBI数据库,获取Mce4A蛋白基因信息;运用ProParam工具和ProScale工具分析Mce4A蛋白预测基本理化性质和疏水性;利用SignaIP 4.1Server和TMHMM Server v.2.0工具预测Mce4A蛋白的信号肽和跨膜区;应用SOMPA工具分析Mce4A蛋白的二级结构,并采用SWISS MODEL工具对该蛋白进行三级结构同源建模;运用ABCpred软件和SYFPEITHI预测Mce4A蛋白的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位;运用STRING数据库预测Mce4A蛋白的相互作用蛋白。结果Mce4A蛋白基因全长1 203bp,编码400个氨基酸。该蛋白理论分子质量单位(Mr)为42.418 33×103,理论等电点为7.69,分子式为C1900H3022N510O576S6,半衰期为4.4h,脂肪系数为93.70,不稳定系数为27.89,总平均亲水性为0.023,为稳定性亲水蛋白。预测该蛋白在13-35位氨基酸之间形成一个典型的跨膜螺旋区,无信号肽。二级结构中α螺旋、β折叠、β转角、无规则卷曲分别占37%、21%、6.5%和35.5%。预测该蛋白共有18个B细胞抗原表位和23个CTL表位。相互作用蛋白预测显示该蛋白可与5个蛋白协同发挥作用。结论生物信息学分析Mce4A蛋白为稳定性亲水蛋白,具有跨膜区,是典型的跨膜蛋白,在MTB入侵宿主巨噬细胞及存活起重要的作用。该蛋白含有潜在的B、T细胞抗原表位,为药物作用靶位的选定和药物分子的设计提供了新的方向。

摘要：目的:克隆嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)胞外段编码序列,体外表达和鉴定重组P2X7R胞外段蛋白。方法:采用德泰生物密码子优化软件MaxCodon^TM Optimization Program(V13),对P2X7R胞外段蛋白氨基酸编码序列进行优化并设计PCR扩增引物。采用重叠PCR扩增目标基因,通过限制性酶切位点NdeⅠ和HindⅢ,将P2X7R胞外段编码序列定向插入原核表达载体pET30a(+),构建pET30a-P2X7R重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(***)BL21(DE3+)表达菌种中,进行融合表达,诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。重组蛋白含6×His纯化标签,亲和层析(Ni-IDA树脂)纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot鉴定纯化产物。结果:PCR扩增的P2X7R胞外段蛋白编码序列长度为885 bp,成功构建重组pET30a-P2X7R质粒,并转化至*** BL21(DE3+)菌株中。融合型表达的重组蛋白分子量约为34 kD,可被抗His标签单克隆抗体特异性识别。结论:成功克隆P2X7R胞外段蛋白编码序列、诱导表达并纯化了重组P2X7R胞外段蛋白,为今后制备抗人P2X7R胞外段蛋白的单克隆抗体奠定了坚实的基础。

摘要：《检验技能学》是医学检验技术专业的专业核心主干课程,是一门包括基本临床技能、专业基础技能、专业提升技能三个模块并以应用为主的课程,针对即将学习临床知识和技能的学生而设计,课程目的在于使学生更早地接触和了解临床,为专业知识的学习打好基础,培养学生尽早形成临床思维能力。为响应国家教育目标,加强学生职业道德素养,激发学生求知欲,提高课程教学实效性,本校医学检验学院对《检验技能学》进行教学模式改革。以“你眼中的微生物”教学模块为例阐述教学改革过程和效果:课前基于课程教学目标确定教学内容,充分挖掘思政元素,通过翻转课堂的形式进行教学,课后通过雨课堂测验评价教学效果。课程改革将思想政治教育贯穿教学设计始终,力求提高学生的自主学习能力,为国家培养具备社会主义核心价值观的优秀医学检验人才。

摘要：探讨基于COVID-19检测的免疫学与检验综合设计性实验线上教学效果,以提高线上教学效果和学生综合素质。

摘要：目的 设计HIV-1 gp140蛋白疫苗并进行免疫原性初步研究.方法 构建包含不同信号肽的gp140蛋白表达克隆,对表达效率和信号肽切割效率进行比较筛选,同时对不同长度C末端的gp140进行比较,最终获得优化的HIV-1 gp140免疫原.采用不同的免疫方式免疫豚鼠,通过特异性结合抗体检测和中和抗体检测进行免疫效果评价.结果 设计的信号肽具有较好的分泌、切割效率,重组HIV-1 gp140抗原获得良好的表达.重组蛋白疫苗单独免疫就能诱导很强的结合抗体和中和抗体反应,反应强度高于重组DNA疫苗以及痘苗病毒载体疫苗的联合免疫.不同C末端长度的gp140蛋白免疫效果没有显著的差异,但长C末端的gp140蛋白免疫效果稍好.结论 优化设计了HIV-1 gp140蛋白疫苗,设计的重组疫苗获得较好的免疫效果.

摘要：提高教育质量是当前研究生教育最核心最紧迫的任务。医学研究生课题设计能力对科研能力至关重要,是提高研究生教育质量的关键环节。笔者分析了课题设计的特点:实用性、可行性、内生性、科学性、系统性和创新性,提出了提升医学研究生课题设计能力的策略:需求分析,着眼未来;评估可行性,完善方案;加强自身素质,提高能动性;科学设计,提升质量;系统把握,准确定位;多元发展,引领创新。医学研究生只有提高课题设计能力才能为国家科学进步做出创造性贡献。