摘要：目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法:以出生后6 d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GeneID:71421)],包括编码区全长在内的部分cDNA序列,克隆到pMD18-T克隆载体,酶切鉴定正确;然后亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定及测序正确。将构建的重组载体磷酸钙法转染293T细胞,检测Amelotin的表达情况。结果:成功克隆了Amelotin基因编码区全长序列;构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,磷酸钙法转染后可检测到Amelotin基因在293T细胞中的表达。结论:构建了重组pcDNA3.1-Amelotin真核表达载体,并成功表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性奠定了基础。

摘要：目的探讨低氧预处理人牙髓干细胞移植(H-hDPSCs)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑白质损伤及内源性神经干细胞的影响。方法将健康7 d龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组、常氧培养hDPSC移植组(N-hDPSCs组)及低氧预处理hDPSC移植组(H-hDPSCs组),每组11只。采用经典的Rice-Vannucci法复制HIBD模型。模型复制后7 d采用增殖细胞核抗原(PCNA)/巢蛋白(Nestin)免疫荧光双标法检测大鼠侧脑室室管膜下区内源性神经干细胞(NSCs)的增殖;模型复制后3周,滑竿实验、Y迷宫实验及模型复制后4周Morris水迷宫实验检测大鼠的运动及空间记忆能力;行为学实验后采用神经元特异性核蛋白(NeuN)免疫荧光法检测大鼠脑组织皮层和海马CA1区神经元的表达;采用髓鞘碱性蛋白(MBP)及神经纤维丝蛋白重链(NF200)免疫荧光双标法检测纹状体及胼胝体区髓鞘及神经纤维的表达。结果HIBD组模型复制后7 d的侧脑室室管膜下区增殖NSCs数较假手术组少(P<0.05),N-hDPSCs组、H-hDPSCs组较HIBD组多,但较假手术组少(P<0.05),N-hDPSCs组较H-hDPSCs组少(P<0.05)。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组模型复制后3周爬杆时间较假手术组长(P<0.05),但较HIBD组短(P<0.05),H-hDPSCs组较N-hDPSCs组短(P<0.05)。HIBD组新异臂停留时间较假手术组短(P<0.05),N-hDPSCs组、H-hDPSCs组较HIBD组长(P<0.05),但较假手术组短(P<0.05),而N-hDPSCs组较H-hDPSCs组短(P<0.05)。各组大鼠第1天、第2天、第3天、第4天逃避潜伏期比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点逃避潜伏期有差异(F=662.825,P=0.000);(2)各组逃避潜伏期有差异(F=109.286,P=0.000),N-hDPSCs组、H-hDPSCs组大鼠较假手术组长(P<0.05),但均较HIBD组短(P<0.05),H-hDPSCs组较N-hDPSCs组短(P<0.05);(3)各组逃避潜伏期变化趋势有差异(F=20.543,P=0.000)。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组大鼠在第5天的空间探索实验中穿台次数较假手术组少(P<0.05),但较HIBD组多(P<0.05),H-hDPSCs组较N-hDPSCs组多(P<0.05)。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组大鼠在目标象逗留时间百分比较假手术组小(P<0.05),但较HIBD组多(P<0.05),H-hDPSCs组较N-hDPSCs组多(P<0.05)。NhDPSCs组、H-hDPSCs组NeuN阳性细胞数较HIBD组多(P<0.05),但较假手术组少(P<0.05),N-hDPSCs组较H-hDPSCs组少(P<0.05)。N-hDPSCs组、H-hDPSCs组纹状体、胼胝体区MBP、NF200蛋白平均荧光强度高于HIBD组(P<0.05),但低于假手术组(P<0.05),H-hDPSCs组高于N-hDPSCs组(P<0.05)。结论HhDPSCs与N-hDPSCs移植可有效改善HIBD新生大鼠远期行为学,并促进HIBD新生大鼠内源性NSCs的增殖,减轻脑白质损伤进而促进HIBD神经修复,且H-hDPSCs移植的疗效优于N-hDPSCs。

摘要：目的研究肌节同源结构域同源框基因2(MSX2)对小鼠成釉细胞釉基质蛋白的表达及牙釉质形成的影响。方法免疫化学染色检测出生后小鼠牙胚MSX2的表达情况及其在成釉细胞中的定位;设计并合成靶向小鼠MSX2基因的短发夹RNA(shRNA)寡聚单链DNA,将退火成双链的DNA构建到RNAi慢病毒载体pG MLV-SC5中,包装慢病毒;慢病毒感染成釉细胞,实时荧光定量PCR筛选最佳干扰片段,并检测釉原蛋白(Amelx)、成釉蛋白(Ambn)、釉蛋白(Enam)、釉成熟蛋白(Amtn)及激肽释放酶4(Klk4)在mRNA水平表达的改变。通过分离小鼠E18.5牙胚并感染靶向MSX2的RNAi重组慢病毒,种植于小鼠肾囊膜下,10周后,取出组织,分离并观察牙齿结构。结果 MSX2在小鼠成釉细胞分泌期及成熟期均有表达,但分泌期表达信号较弱,成熟期较强。成功包装靶向MSX2基因的RNAi慢病毒MSX2-shRNA,敲低MSX2基因表达可不同程度地降低成釉细胞Amelx及Klk4的mRNA水平。靶向MSX2基因的RNAi慢病毒感染牙胚后其牙釉质矿化程度降低。结论 MSX2基因在小鼠成釉细胞中表达,敲低成釉细胞MSX2并促进釉基质蛋白基因的表达和牙釉质的矿化。

摘要：目的应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113和SCC-4中Rho A基因的表达,探讨Rho A基因表达下调对舌癌细胞侵袭的影响。方法登录Genbank数据库确定人Rho A基因序列,针对Rho A的基因序列设计短链RNA,利用Lipofectamine2000介导法将Rho A-si RNA转染至舌癌Tca8113和SCC-4细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后的舌癌细胞中Rho A m RNA的表达,蛋白质印迹法检测Rho A、半乳糖凝集素-3(galectin-3)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果舌癌细胞转染Rho A-si RNA后,Rho A的基因和蛋白表达下降,galectin-3和MMP-9蛋白表达下降,细胞体外侵袭能力降低。结论 Rho A-si RNA可以有效地抑制舌癌Tca8113和SCC-4细胞中Rho A的表达,通过降低galectin-3和MMP-9的表达从而降低细胞的侵袭能力。Rho A在舌癌的侵袭和转移中可能发挥重要的作用。

摘要：目的调查非口腔医学专业大学生口腔健康状况,为指导大学生口腔保健提供科学依据。方法通过自行设计调查问卷和口腔检查,对潍坊医学院麻醉学系554名在校生进行龋齿患病状况、口腔自我保健知识及防治状况调查。结果大学生患龋率为46.39%,龋均为0.71,龋齿充填率为35.19%;患龋情况城市学生比农村学生严重,女生比男生重,各年级之间差异有统计学意义(P<0.05);龋齿充填率城市学生高于农村学生,各年级之间差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析表明,初次刷牙时间、每天刷牙次数、每次刷牙持续时间、对甜食的喜好程度是大学生龋患的主要影响因素。结论非口腔医学专业大学生对口腔卫生保健知识了解较少,应加强口腔卫生宣传教育,使口腔疾病早发现、早预防、早治疗。

摘要：目的:比较改良与传统2种即刻种植方法在下颌磨牙种植中的精准度。方法 :选择下颌磨牙区即刻种植患者24例,共计24个种植位点。术前拍摄锥形束CT(CBCT),用数字化软件Simplant 18.0设计种植体理想的三维位置。试验组以剩余天然牙体组织为参照,优先预备种植窝洞,微创拔除患牙后再将种植体植入;对照组按照传统流程,依次微创拔牙、备洞、植入种植体。术后均行CBCT检查,并用Simplant 18.0测量术前、术后三维位置的误差。采用SPSS 17.0软件包进行统计学分析。结果:24例患者均顺利完成手术,5~6个月后行冠部修复,种植体保留率为100%。试验组与对照组角度偏差分别为(4.492±0.912)°和(7.255±1.307)°,颈部水平偏差分别为(0.379±0.083) mm和(1.229±0.270) mm,测量根端水平偏差分别为(1.263±0.267) mm和(2.183±0.264) mm;计算根端水平偏差分别为(1.324±0.203) mm和(2.709±0.383) mm,深度偏差分别为(0.663±0.123) mm和(1.533±0.155) mm;所有项目的差异值均有统计学意义(P<0.01)。结论:改良即刻种植相比传统即刻种植,可提高下颌磨牙区种植体的精准度。

摘要：目的通过小干扰RNA(siRNA)干扰技术体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(Icmt)基因,探讨体外沉默Icmt对舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖和凋亡能力的影响。方法针对人Icmt基因序列设计并构建3条siRNA,经脂质体瞬时转染技术转染抑制TSCC细胞系CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,同时设置空白对照组(只加入转染试剂,不加入siRNA)和阴性对照组(转染NC-siRNA)。应用荧光组(荧光基团Cy3标记siRNA)检测siRNA转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测沉默Icmt后各组细胞的Icmt、RhoA mRNA表达,选取沉默效率最高组作为实验组进行后续实验。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、RhoA的蛋白表达及RhoA膜蛋白的表达、细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖能力、细胞周期变化;Annexin V-APC/碘化丙啶(PI)荧光双染法检测各组细胞的凋亡能力。采用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞Icmt mRNA和蛋白表达下降(P0.05),但RhoA膜蛋白表达显著降低(P0.05),但ERK的磷酸化水平明显下降(P<0.05)。CAL-27及SCC-4细胞周期发生改变,细胞比例在G1期增加,S期降低,G2期无明显改变,细胞周期被阻滞在G1/S期(P<0.05);细胞增殖活性下降、凋亡能力增加。结论体外沉默TSCC细胞Icmt基因,可降低RhoA膜靶向定位,抑制细胞增殖、诱导凋亡,提示Icmt在TSCC增殖和凋亡中可能发挥重要作用,可能作为TSCC基因治疗的分子靶点。

摘要：目的:探讨可摘局部义齿对龈沟液中白介素-1(IL-1)表达水平的影响,为临床可摘局部义齿设计和制作提供依据。方法:对牙列缺损患者进行铸造支架式可摘局部义齿修复,修复后6个月,分别采取近缺隙侧基牙区和非基牙区龈沟液,用酶联免疫吸附法测定分析龈沟液中IL-1的表达水平。结果:可摘局部义齿修复后,近缺隙侧基牙区龈沟液中IL-1的表达水平升高,非基牙区无明显改变。结论:对于可摘局部义齿修复者,近缺隙侧基牙龈沟液中IL-1的表达水平升高,且明显高于非基牙区龈沟液IL-1水平。

摘要：目的探讨在下颌后牙区连续多牙缺失下数字化种植导板的应用价值.方法收集拟行种植修复的60例连续多牙缺失的患者临床资料,根据患者意向,将病例分为两组,研究组(30例)采用数字化种植导板辅助完成种植,术前拍摄口腔科锥形束CT(CBCT),制取患者牙列模型,通过专用种植软件3shape完成种植导板的设计,种植导板的打印由3D打印完成;对照组(30例)是医师根据自己的临床经验靠自由手完成种植手术.两组术后均进行CBCT拍摄,评估种植体在三维位置上的差异,通过测量对比术后与术前设计的三维位置,分析种植体的精确度.结果两组种植体的初期稳定性在植入时均可达到良好的状态,种植体周围软硬组织较稳定.研究组在种植导板的辅助下顺利完成种植治疗,患者术中无明显不适感,术后肿胀及疼痛程度不明显,患者对结果较满意.研究组与对照组初期种植成功率比较差异无统计学意义(P=0.379,P>0.05);研究组植入的种植体颈部偏离值、根尖部偏离值、角度偏离值、深度偏离值均小于对照组[颈部偏差值(t=10.567,P0.05).结论数字化种植导板辅助连续多牙缺失种植修复有较高的临床应用价值,使种植体在颌骨上的三维位置更精准及合理,为后期冠修复奠定良好基础,充分体现以修复为导向的种植理念.

摘要：目的利用锥形束CT(CBCT)测量健康成年人下颌后牙区颊舌侧牙槽骨骨皮质、骨松质的密度,评价不同性别、不同部位骨密度的区别,为临床设计种植支抗位点提供理论参考。方法随机选取2016年6月~12月在口腔科进行CBCT扫描的42例(男22例,女20例)潍坊市区健康成年患者,年龄范围20~40岁,测量其左侧下颌后区的颊、舌侧牙槽骨骨皮质及松质骨骨密度的CT值。结果下颌骨自尖牙至磨牙颊侧牙槽骨骨皮质密度出现递增趋势,在第一、二磨牙间最高,差异有统计学意义(P<0.05);舌侧牙槽骨骨皮质密度也显示出类似趋势;松质骨骨密度之间差异无显著性;男女之间同一部位牙槽骨骨皮质及松质骨均无统计学差异。结论健康成年人下颌后牙区颊舌侧牙槽骨骨皮质密度由近中向远中逐渐递增,在磨牙区密度最高;松质骨密度逐渐降低。