摘要：目的:研究慢病毒介导的PLK1(Polo-like kinase1)基因RNAi对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响.方法:利用RT-PCR和Western blot检测不同食管鳞癌细胞中PLK1的表达.根据人PLK1mRNA序列设计干扰片段,Western blot检测干扰效率;利用划痕愈合实验及Transwell实验研究靶向PLK1的RNAi对食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的影响.将有效干扰序列构建至慢病毒干扰载体pGLV/H1/GFP+Puro中,测序鉴定.重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,制备的重组病毒感染食管鳞癌细胞,利用荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率;利用裸鼠肺转移模型实验研究慢病毒介导的PLK1基因RNAi对食管鳞癌细胞在体内侵袭转移能力的影响.结果:筛选出一种高表达PLK1的食管鳞癌细胞株TE-8用于实验研究;筛选出有效的干扰片段,并成功构建靶向干扰PLK1基因的慢病毒载体,制备重组病毒颗粒用于感染食管鳞癌细胞;靶向PLK1的RNAi在体内外均能明显抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移.结论:靶向干扰PLK1基因的重组慢病毒能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移,PLK1基因影响着食管鳞癌的恶性进展.

摘要：目的通过重叠延伸拼接PCR(SOE-PCR)技术克隆融合基因ScFv(3G11)-mms13并构建融合蛋白表达载体pET30a(+)-ScFv(3G11)-mms13,为重组制备肿瘤靶向细菌磁小体提供转基因载体。方法根据mms13基因和ScFv(3G11)基因的序列,设计以PCR引物,以克隆载体pMD18-mms13和pMD18-ScFv为模板,采用SOE-PCR技术构建融合基因ScFv-Linker-mms13。进而将融合基因ScFv-mms13与pET30a(+)连接构建重组表达载体pET30a(+)-ScFv-mms13,测序后应用软件DNAMAN进行分析。结果应用重叠延伸拼接PCR方法构建融合基因ScFv-linker-mms13(1158bp),然后通过克隆技术得到重组质粒pMD18-ScFvmms13。将融合基因ScFv-Linker-mms13插入到pET30a(+)构建了重组表达载体pET30a(+)-ScFv-mms13;菌落PCR、酶切、DNA测序鉴定结果均表明目的片段准确地插入到表达载体中。结论通过SOE-PCR技术扩增了预先设计的长达1158bp的融合基因片段ScFv-Linker-mms13,并成功构建了重组质粒pMD18-ScFv-mms13及重组表达载体pET30a(+)-ScFv-mms13,为磁小体用于肿瘤靶向治疗研究提供了实验材料。

摘要：运动康复专业是在“体医融合”背景下逐渐开展起来的新兴专业,对于该专业的特色化教学还没有全面发展。本团队针对运动康复专业的组织学与胚胎学教学设计进行分析,通过在以案例为线索的理论知识融合、以实践为切入的实验教学改革、以康复为特色的健康理念引领、以思政为关键的协同育人教学模式等方面做出优化,探析突出运动康复专业特色和应用的组织学与胚胎学教学模式改革,提升运动康复专业人才培养质量。