摘要：目的构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染人乳腺癌细胞MCF-7并检测干扰效果。方法针对人ICAM-1基因设计并合成3条靶向短发夹RNA(shRNA)干扰序列(ICAM-1 shRNA1、ICAM-1 shRNA2和ICAM-1 shRNA3)以及一个阴性对照序列(NS),将其克隆入载体p LKO.1-SP6-PGK-GFP中,测序正确后利用3个质粒病毒包装系统(干扰质粒载体-ps PAX2-p MD2.G)转染HEK293T细胞并包装慢病毒。收获病毒上清并测定病毒滴度。将所获病毒感染MCF-7细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果菌落PCR结果显示目的片段成功插入p LKO.1-SP6-PGK-GFP载体中,DNA测序证实无误。将所制备之慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western blot结果证实ICAM-1 shRNA3组ICAM-1 mRNA和蛋白水平有明显下降。结论成功构建了人ICAM-1基因shRNA慢病毒干扰载体,包装慢病毒后,感染MCF-7细胞可引起ICAM-1表达下调。

摘要：目的 探讨补气养血法治疗再生障碍性贫血(Aplastic anemia, AA)有效患者的临床特征。方法 采用前瞻性、随机、双盲、安慰剂对照、多中心研究设计。用分层区组随机方法将患者分为三组,补肾生血组、益气养血组、对照组,中药治疗分别予补肾填精颗粒、益气养血颗粒、安慰剂(50%补肾填精颗粒),均联合口服西药环孢素及雄激素。每组治疗以3个月为一疗程,连续观察两个疗程。观察治疗前后血常规、白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数、中性粒细胞计数,输血情况,中医证候积分、生活质量评分,安全性指标,并记录不良反应事件,观察期结束后进行疗效评价。选取2018年9月—2021年3月就诊于中国中医科学院西苑医院、中国中医科学院广安门医院等19个分中心的164例运用补气养血法治疗的AA患者,根据疗效标准将164例AA患者进行疗效评定,其中有效患者131例,无效患者33例;采集有效和无效患者的临床资料,并运用SPSS 20.0统计学软件进行分析,总结有效患者的临床特征。结果 独立样本t检验结果显示,治疗前血小板、中性粒细胞越高的AA患者,益气养血方联合西药治疗更易获得疗效,差异具有统计学意义(P<0.05);χ^(2)检验结果显示,无过敏史、治疗前血小板≥40×10^(9)/L的AA患者,益气养血方联合西药治疗更易获得疗效,差异具有统计学意义(P<0.05);Fisher检验结果显示,病程<1个月、治疗前白细胞≥0.5×10^(9)/L、中性粒细胞≥2.0×10^(9)/L、染色体核型正常的AA患者,益气养血方联合西药治疗更易取得疗效,差异具有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,病程越短,益气养血方联合西药治疗AA获得的疗效越好,差异具有统计学意义(P<0.05);ROC曲线图表明,多因素Logistic回归分析所建立的临床特征模型来预测益气养血方联合西药治疗AA有效的这一方法是可取的。结论 益气养血方联合西药为主治疗AA有效率达79.9%,无过敏史、病程<1个月且越短,血小板≥40×10^(9)/L且血小板越高,白细胞≥0.5×10^(9)/L,中性粒细胞≥2.0×10^(9)/L且越高,染色体核型正常的AA患者采用益气养血方联合西药治疗更易获得疗效。