摘要：目的建立多重PCR用于同时检测苍白密螺旋体(梅毒螺旋体)、单纯疱疹病毒和杜氏嗜血菌。方法根据各病原体特异性基因序列,即单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ型(HSVⅠ和HSVⅡ)的DNA聚合酶基因、苍白密螺旋体47×103膜蛋白基因及杜氏嗜血菌16S rRNA基因序列,自行设计3对特异寡核苷酸引物,建立同时检测3种病原体DNA的多重PCR。结果各特异性引物仅扩增相应的病原体DNA,即苍白密螺旋体、单纯疱疹病毒、杜氏嗜血菌扩增靶DNA片段分别为202、2521、52 bp;各病原体DNA连续10倍稀释,可检测的DNA最低量为0.012ng;其他几种生殖道常见菌及人基因组DNA不被上述引物扩增。结论多重PCR同时检测苍白密螺旋体、单纯疱疹病毒和杜氏嗜血菌DNA具有较好的特异性,将可能为患者提供敏感、快速和准确的检测手段。

摘要：目的建立多重PCR用于快速检测引起性传播生殖器溃疡性疾病(GUD)常见病原体。方法根据各病原体特异性基因序列,即单纯疱疹病毒I和II型(HSV1和HSV2)的DNA聚合酶基因、梅毒螺旋体47KD膜蛋白基因、沙眼衣原体的主要外膜蛋白基因(omp1/ompb)及杜克雷嗜血杆菌16SrRNA基因序列,自行设计4对特异寡核苷酸引物,建立同时检测4种病原体DNA的多重PCR。结果各特异性引物仅扩增相应的病原体DNA。其他几种生殖道常见菌及人基因组DNA不被上述引物扩增。检测了51例临床标本,多重PCR检查结果与暗视野显微镜检查梅毒螺旋体和培养法检查HSV结果进行比较,均有较好的一致性。结论多重PCR检测4种引起GUD常见病原体DNA具有较好的特异性,可为GUD患者提供敏感、快速和准确的诊断手段。

摘要：目的建立双引物聚合酶链反应(PCR)用于同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型。方法基于单纯疱疹病毒II型(HSV-2)的DNA聚合酶基因以及梅毒螺旋体47KD膜蛋白基因序列,自行设计2对特异性寡核苷酸引物,建立了同时检测上述2种病原体的双引物PCR。结果各特异性引物仅扩增相应的病原体DNA,即单纯疱疹病毒Ⅱ型扩增产物为202bp以及梅毒螺旋体扩增产物为252bp。其他11种生殖道常见微生物及正常人基因组DNA不被扩增。检测了51例临床标本,梅毒螺旋体暗视野显微镜检查阳性检出率为15.7%,双引物PCR阳性检出率为19.6%;二种方法检测结果间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。HSV阳性培养率23.6%,双引物PCR阳性率47.1%,双引物PCR阳性检出率显著高于HSV培养且差异有统计学意义(P=0.019);上述临床标本分别进行了2种病原体的单引物PCR,与双引物PCR对照结果完全一致。结论我们建立的双引物PCR一次可同时检测2种病原体,且有快速、敏感、特异以及简便的特点。